右歸丸對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度、神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽的影響

我們以SD大鼠為研究對象建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型，探討右歸丸對大鼠骨密度、神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽的影響。 

一、材料與方法

1．材料：清潔級(jí)SD大鼠60只，體重180~ 220 g；X線骨密度儀（Lunar Prodigy）購自美國通用公司；神經(jīng)肽Y酶試劑盒購自上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司；血管活性腸肽試劑盒購自北京雅安達(dá)生物技術(shù)有限公司。
2．絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松大鼠模型制備：雌性清潔劑SD大鼠60只分為假手術(shù)組、模型組和實(shí)驗(yàn)組，各20只。模型組和實(shí)驗(yàn)組去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠模型制備：大鼠麻醉固定后，探查雙側(cè)卵巢并結(jié)扎后切除；假手術(shù)組打開大鼠腹腔后暴露雙側(cè)卵巢后逐層關(guān)閉腹腔，未行卵巢切除術(shù)：實(shí)驗(yàn)組大鼠切除雙側(cè)卵巢后給予右歸丸灌胃3 g/kg體重=假手術(shù)組和模型組以等量生理鹽水灌胃，連續(xù)12周。
3．腰椎及股骨近端骨密度測定：應(yīng)用美國Lunar ProdigyX線骨密度儀，小動(dòng)物分析軟件enCORE( 10. 50. 086)進(jìn)行掃描，測定腰椎和股骨近端的骨密度，具體操作步驟按儀器說明進(jìn)行，避免不同人員操作手法對結(jié)果的影響，3組大鼠均由同一研究者進(jìn)行測定。
4．大鼠骨組織神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽測定：3組大鼠處死后暴露左側(cè)股骨近端及腰椎，截取相同部位的骨組織并稱重后采用液氮冷凍后置入研缽中研磨成勻漿采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒進(jìn)行檢測，檢測方法按試劑盒說明進(jìn)行操作。
5．統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x+s）表示，組間比較采用方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)，以尸<0. 05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
二、結(jié)果
1．各組大鼠骨密度比較：假手術(shù)、模型組和實(shí)驗(yàn)組用藥后3個(gè)月腰椎骨密度分別為(0. 19±0.02)、(0.10±0.08)、(0.15±0. 03) g/cm2 ，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F= 15. 840，P=0.000）；3組股骨近端骨密度分別為(0. 18±0.01)、(0.11±0.09)、(0.16±0.04) g/cm2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=7. 960，P=O．001)。
2．神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽表達(dá)水平比較：假手術(shù)、模型組和實(shí)驗(yàn)組用藥后3個(gè)月神經(jīng)肽Y分別為(1. 34±0.12)、（1. 03士0.17）、(1. 24 +0. 16) mmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=21. 800．P=0.000)：3組血管活性腸肽分別為(1.39±0.15)、(1. 05±0.21)、(1.26±0.23) U/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=14. 780．P=0.000)。
3．骨密度與神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽相關(guān)性：實(shí)驗(yàn)組大鼠骨組織中神經(jīng)肽Y(r=0.630，F(xiàn)=11. 590，P=0.003)和血管活性腸肽(r=0. 820，F(xiàn)=36. 600．P=0.000)與腰椎骨密度存在相關(guān)性，隨著骨密度的增高，神經(jīng)肽和血管活性腸肽明顯增加。
三、討論
本研究中我們采用雙側(cè)卵巢切除的方法建立去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠模型，并對實(shí)驗(yàn)組大鼠給予右歸丸灌胃12周，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組大鼠腰椎和股骨近端骨密度顯著高于模型組，低于假手術(shù)組，提示右歸丸能夠提高去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度，具有抗大鼠骨質(zhì)疏松作用。用藥后實(shí)驗(yàn)組大鼠神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽顯著高于模型組而低于假手術(shù)組。說明右歸丸可明顯提高大鼠骨組織中神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽。本研究結(jié)果顯示‘，大鼠骨密度與骨組織中神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽呈正相關(guān)，提示右歸丸可能通過提高骨組織中中神經(jīng)肽Y和血管活性腸肽水平來達(dá)到抗骨質(zhì)疏松目的。