腫瘤抑制候選基因3在胃癌中的表達及其生物學(xué)功能

本研究探討腫瘤抑制候選基因3( TUSC3)在胃癌組織中的表達并采用小干擾RNA( siRN_N)技術(shù)下調(diào)胃癌細胞株中TUSC3的表達，探討其影響胃癌細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)功能。
一、資料與方法

1．病例資料：手術(shù)治療的胃癌患者44例，術(shù)前未接受新輔助放化療，平均年齡(56.8±18.3)歲，男26例，女18例，I／Ⅱ期20例，Ⅲ／Ⅳ期24例，腫瘤位于賁門18例，幽門20例，位于胃體6例，術(shù)后證實區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者30例。
2．細胞與試劑儀器：胃癌SGC-7901細胞株（美國典型菌種保藏中心）；TUSC3兔抗羊IgG抗體（美國Santa Cruz公司）；mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司）；ABI 7500實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)( FQ-PCR)儀器（美國ABI公司）。
3．免疫組織化學(xué)：免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白，過氧化物酶( SP)法檢測胃癌組織及癌旁組織中TUSC3蛋白的表達，具體操作按實驗室操作流程進行。
4．FQ-PCR:利用Toyobo公司的SYBR GREEN Realtime PCR Master Mix，在ABI 7500 96孔FQ-PCR儀上進行實驗，U6作為內(nèi)參進行定量分析。
5．Transwell實驗：用100¨l無血清培養(yǎng)基重懸SGC-7901細胞并加入Transwell小室上室內(nèi)，下室加入600μl含10%胎牛血清的培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)24—48 h后觀察穿過Transwell小室的細胞數(shù)目。
6．統(tǒng)計學(xué)方法：Stata 12.0統(tǒng)計軟件分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x+s）或“例數(shù)(%)”表示，組間比較采用￡或x2檢驗，以P <0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
二、結(jié)果
1．TUSC3表達：癌組織和癌旁組織中TUSC3陽性率為分別為22. 7% (10/44)和56.8% (25/44)，癌組織顯著低于癌旁組織(X2 =10. 670,P=o.001).

2．TUSC3表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：TUSC3陽性組區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為52%顯著低于陰性組的89.5% (X2=6. 990，P=0. 008)。
3．TUSC3生物學(xué)功能：下調(diào)TUSC3表達后SGC-7901細胞的穿膜能力明顯增強[(98.6±12.4)比( 168.3±18.4)個，t=7. 020，P=0.000]。
三、討論
TUSC3在人類多種腫瘤中缺少表達，包括胃癌、胰腺癌、非小細胞肺癌等。而在癌旁組織中，其表達水平往往高于癌組織，因而提示TUSC3可能為重要的腫瘤抑制因子…。本研究結(jié)果顯示，TUSC3蛋白主要表達于胃癌細胞胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色顆粒狀。癌組織中TUSC3表達水平顯著低于癌旁組織。癌組織與癌旁組織中的差異表達提示TUSC3可能作為重要的腫瘤抑制基因，參與了胃癌的發(fā)生與發(fā)展過程。進一步分析認為，TUSC3陽性表達與區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。這種相關(guān)性可以作為胃癌患者預(yù)后不良的參考指標。細胞學(xué)研究結(jié)果認為，siRNA下調(diào)TUSC3基因表達后細胞穿膜能力明顯增強。因此，TUSC3與胃癌細胞的遷移有關(guān)并可作為預(yù)后不良的標志。