【摘要】 目的 就血細(xì)胞分析儀與鏡檢法計數(shù)低值血小板結(jié)果進(jìn)行比較分析。方法 選取低值血小板患者血標(biāo)本,用儀器進(jìn)行血小板計數(shù),同時血涂片間接計數(shù)血小板并觀察形態(tài),以人工鏡檢法為參考。結(jié)果 鏡檢結(jié)果同儀器結(jié)果存在顯著差異(P<0.05)。結(jié)論 對低值血小板結(jié)果及儀器有錯誤提示或PLT直方圖異常時,要進(jìn)行手工復(fù)檢或重新采血檢測。
【關(guān)鍵詞】 血細(xì)胞分析儀 鏡檢法 低值血小板 比較
血小板計數(shù)是血液檢查的一個重要指標(biāo),特別是對血小板減少的患者,血小板計數(shù)是臨床決定是否進(jìn)行血小板輸注的重要參考指標(biāo),因此準(zhǔn)確計數(shù)血小板顯得尤為重要?,F(xiàn)在,就COULTER LH750計數(shù)低值血小板并與顯微鏡檢進(jìn)行比較分析,以評價低值血小板計數(shù)的準(zhǔn)確性。
1 材料與方法
1.1材料
1.1.1標(biāo)本 選取2009年6-10月住院患者標(biāo)本100例,年齡2-68歲,男性67例,女性32例。血小板均<50×109/L。
1.1.2儀器 血液分析儀COULTER LH750,OLYMPUS顯微鏡。
1.1.3試劑 貝克曼公司血球配套試劑及質(zhì)控液,實(shí)驗室自配瑞氏染液及草酸銨溶液(均按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》(第二版)配制)。
1.2方法
1.2.1抽取患者1.5mg/mlEDTA-K2抗凝靜脈血3ml,每份標(biāo)本制備血涂片各兩張。
1.2.2 LH-750由廠家定期校準(zhǔn)并參加省室間質(zhì)評,成績優(yōu)異。儀器每天進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控,結(jié)果均在控。
1.2.3儀器血小板計數(shù):
每份樣本在儀器上均測定2次,記錄結(jié)果(數(shù)據(jù),錯誤提示及直方圖),求其均值。實(shí)驗在采血后兩小時之內(nèi)完成。
1.2.4血涂片分析:涂片經(jīng)瑞氏染色,選擇厚薄適宜區(qū),計數(shù)1000個紅細(xì)胞并同時計數(shù)所見血小板,求得血小板/紅細(xì)胞之比值。再將此值×紅細(xì)胞數(shù),求得血小板數(shù),并觀察血小板及紅細(xì)胞等形態(tài)[1]。
1.2.5血小板計數(shù)參考方法:WHO血小板計數(shù)方法:取20ul血加入10g/L草酸銨稀釋液0.38ml,溶血10mim后充入計數(shù)板放置30min,用顯微鏡計數(shù)中央大方格四周4個中方格和中央1個中方格中血小板數(shù)。當(dāng)血小板特別少時,僅計數(shù)中央整1大格,此操作均由有經(jīng)驗的檢驗員用雙盲法計數(shù),取兩次結(jié)果的均值。
1.2.6統(tǒng)計學(xué)方法:各項數(shù)據(jù)用 ±S表示,組間比對采用t檢驗,檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
2 結(jié)果
2.1儀器血小板計數(shù)后出現(xiàn)R、曲線擬合不好及有報警提示病例占65%。
2.2血涂片觀察紅細(xì)胞及血小板形態(tài),并依此分組,比較儀器法、血涂片法與鏡檢法結(jié)果,儀器法與鏡檢法計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),血涂片法與鏡檢法計數(shù)結(jié)果比較,大血小板組、小紅細(xì)胞組、紅細(xì)胞碎片組差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),血小板聚集組差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).
3 討論
3.1血細(xì)胞分析儀是計數(shù)血小板的主要儀器,LH750采用電阻抗法計數(shù)2-20fl 的血小板數(shù)量,再擬合出一條0-70fl的曲線,目的是排除計數(shù)干擾,但條件不滿足時,儀器不能給出擬合曲線,這時血小板數(shù)值后出現(xiàn)R,通常導(dǎo)致R的原因有:出現(xiàn)異常形態(tài)的血小板,血小板發(fā)生聚集,存在細(xì)胞碎片如:紅細(xì)胞碎片、血小板大小不一(輸血后),電磁波或噪音干擾小孔計數(shù)等。 本實(shí)驗結(jié)果表明,儀器曲線擬合不好或報警提示占65%,血涂片鏡檢所見,大血小板、小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片及血小板聚集病例共53%,說明在低值病理標(biāo)本中干擾物質(zhì)較常見,導(dǎo)致血小板計數(shù)結(jié)果出現(xiàn)偏差,小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片的體積與血小板分布體積接近時,儀器識別不清將誤認(rèn)為是血小板,使檢測結(jié)果偏高,而將大血小板誤認(rèn)為紅細(xì)胞計數(shù),將血小板凝集團(tuán)塊當(dāng)作白細(xì)胞來計數(shù),使計數(shù)假性減少[2]。
3.2對血小板嚴(yán)重減少的患者,由于超出了電阻抗法檢測血小板的線性范圍,須用參考方法進(jìn)行復(fù)檢。本組資料顯示,大血小板組、小紅細(xì)胞組及紅細(xì)胞碎片組,血涂片法與鏡檢法結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義,采用血涂片法可反映患者血小板數(shù)量及形態(tài)特點(diǎn)。有人認(rèn)為,采用血涂片計數(shù)血小板此法雖不十分精確,但可從另一側(cè)面直觀地“間接”計數(shù)血小板,還可觀察血小板的大小、形態(tài)、有無聚集及聚集體大小等,是一種簡單易行的方法[3]。但對血小板聚集組,血涂片法與鏡檢法結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義,可能與血小板聚集成團(tuán)、血小板分布不均,導(dǎo)致計數(shù)較困難有關(guān)。
參 考 文 獻(xiàn)
[1] Kunicka JE,Fischer G,Murphy J,et al. Improved platelet counting: a proposed new reference procedure [J]. Brit J Heamat,2000,10(8):228-235.
[2] TATSUMIN ,TSUDA I,FUNAHARA Y.Assessment of hematological data obtained by the aperture impedance method in blood from patients with thalassemia or hemoglobinpoathy[J].ICMR Ann,1998,8:49-60.
[3] 楊良.血涂片血小板計數(shù)方法的意義[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2009,1(6):17-18.