兩種方法檢測(cè)血清人附睪分泌蛋白在盆腔疾病診斷中的研究

　　近年來，卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)死亡率高的惡性腫瘤，半數(shù)以上診斷時(shí)已為晚期。5年生存率僅為35%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于早期卵巢癌90%的5年生存率，因此早期診斷是改善卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的關(guān)鍵。CA125是傳統(tǒng)的盆腔腫瘤標(biāo)志物，其特點(diǎn)是敏感性高，尤其對(duì)晚期卵巢癌的診斷效果良好，但其特異性較低，影響其臨床診斷的準(zhǔn)確性。Moore等報(bào)告新型腫瘤標(biāo)志物人附果分泌蛋白，與CA125相比對(duì)早期疾病具有高敏感性及高特異性的優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了CA125早期診斷敏感性低、特異性較差的缺點(diǎn)。本文旨在通過檢測(cè)健康體檢者及盆腔疾病患者血清HE4水平，探討HE4在卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌診斷以及良惡性鑒別診斷中發(fā)揮的重要作用。目前，臨床常用的HE4的檢測(cè)方法有兩種，即電化學(xué)發(fā)光法和酶免法。本文分別應(yīng)用兩種方法檢測(cè)卵巢癌患者血清HE4水平，通過繪制受試者工作特征曲線并計(jì)算曲線下面積比較兩種方法檢測(cè)卵巢癌的效能。 　　

　　1材料與方法 　　

　　1.1標(biāo)本來源及分組 　　

　　選擇2012年6月至11月因婦科盆腔疾病人院，并擬行手術(shù)治療的患者，剔除存在其他原因影響腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)合并癥的患者，且臨床資料完整二以術(shù)后病理診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，其中包括卵巢癌組85例、子宮內(nèi)膜癌組42例子宮內(nèi)膜異位癥組21例、卵巢良性疾病組33例，同時(shí)收集女性健康體檢者血清30例作為健康對(duì)照組。本研究獲患者知情同意，符合倫理委員會(huì)相關(guān)規(guī)定。 　　

　　清晨空腹抽取肘部靜脈血3mL,3000r/min離心機(jī)中離心3min，取上層血清待用。 　　

　　1.2儀器與方法 　　

　　采用德國(guó)羅氏E170電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀及其配套的試劑(lot:168554)、定標(biāo)液(lot:167348)、質(zhì)控液(lot:168721)及其他耗材，實(shí)驗(yàn)前按常規(guī)對(duì)試劑進(jìn)行定標(biāo)及室內(nèi)質(zhì)控的檢測(cè);酶免法檢測(cè)HE4采用康乃格公司生產(chǎn)的HE4檢測(cè)試劑盒，依次加人隨盒附帶標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及各檢測(cè)標(biāo)本，具體步驟參照腫瘤標(biāo)志物室人附肇分泌蛋白檢測(cè)SOP文件。 　　

　　1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 　　

　　血清HE4水平頻數(shù)分布不對(duì)稱，呈偏態(tài)分布，以中位數(shù)表示。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)不同疾病組間HE4的比較，分別采用多個(gè)獨(dú)立樣本的秩和檢驗(yàn)及兩組間的秩和檢驗(yàn)。比較兩種方法檢測(cè)準(zhǔn)確性時(shí)繪制受試者工作曲線，并計(jì)算ROC-AUC，用以反映診斷試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，其結(jié)果越接近1，說明診斷實(shí)驗(yàn)的價(jià)值越高。電化學(xué)發(fā)光法與酶免法檢測(cè)結(jié)果的比較采用兩相關(guān)樣本秩和檢驗(yàn)。當(dāng)P<0.05時(shí)，為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 　　

　　2結(jié)果
　　2.1各臨床分組血清HE4檢測(cè)濃度的比較
　　卵巢癌組及子宮內(nèi)膜癌組，血清HE4水平增高卵巢癌組血清HE4水平明顯高于卵巢良哇疾病組及健康對(duì)照組，子宮內(nèi)膜癌組血清HE4水平明顯高于子宮內(nèi)膜異位癥組及健康對(duì)照組，而卵巢良性疾病組、子宮內(nèi)膜異位癥組及健康對(duì)照組三組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 　　

　　2.2HE4在卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌的鑒別診斷中的性能評(píng)價(jià)
　　血清HE4檢測(cè)在鑒別診斷卵巢癌與卵巢良勝疾病及子宮內(nèi)膜癌與子宮內(nèi)膜異位癥中均具有很好的診斷準(zhǔn)確性(ROC-AUC)，由此分析其佳判讀點(diǎn)及佳判讀點(diǎn)時(shí)的敏感性及特異性。 　　

　　2.3電化學(xué)發(fā)光法與酶免法的比較 　　

　　分別采用電化學(xué)發(fā)光法及酶免法檢測(cè)血清HE4濃度。比較兩種方法檢測(cè)血清HE4水平是否相同，采用兩相關(guān)樣本的秩和檢驗(yàn)，兩種方法險(xiǎn)測(cè)血清HE4水平有差異(P<0.001)二以卵巢良性疾病組作為對(duì)照組，分別繪制電化學(xué)發(fā)光法及酶免法兩種方法的受試者工作曲線，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清HE4的ROC-AUC為0.869,酶免法ROC-AUC為0.794。兩種方法的大約登指數(shù)分別為0.647和0.576，說明電化學(xué)發(fā)光法的檢測(cè)效果優(yōu)于酶免法。兩種方法鑒別診斷卵巢癌的佳判讀值分別為86.02pmol/L和76.76pmol/L。 　　

　　3討論
　　CA125為傳統(tǒng)的盆腔腫瘤標(biāo)志物，廣泛的應(yīng)用于卵巢癌的診斷、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的判斷及療效評(píng)估中，但在盆腔疾布的鑒別診斷中.其診斷準(zhǔn)確性較低，在很多盆腔良性疾有中都有增高，如子宮內(nèi)膜異位癥、子宮腺肌癥、盆腔炎癥等，因此臨床迫切需要一種靈敏度和特異度均較高的檢測(cè)項(xiàng)目，以利于卵巢癌的早期診斷及盆腔疾病的鑒別診斷。 　　

　　人附攀分泌蛋白(HE4)基因是由Kirchhoff等發(fā)現(xiàn)的，其編碼的蛋白質(zhì)在正常的卵巢組織幾乎不表達(dá)，在其他惡性腫瘤中低表達(dá)或不表達(dá)，在卵巢惡性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，尤其對(duì)早期卵巢癌的診斷具有重要的診斷意義。此外，有報(bào)道HE4也可作為診斷子宮內(nèi)膜癌的良好血清學(xué)標(biāo)志物。 　　

　　本研究通過對(duì)211名女性血清HE4的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，卵巢癌組血清HE4水平明顯高于卵巢良勝疾病組及健康對(duì)照組;子宮內(nèi)膜癌組血清HE4水平明顯高于子宮內(nèi)膜異位癥組及健康對(duì)照組;卵巢良h}疾病組、子宮內(nèi)膜異位癥組及健康對(duì)照組三組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為了探討HE4在良惡性盆腔疾病中的診斷價(jià)值，分別以卵巢良性疾病組及子宮內(nèi)膜異位癥組作為對(duì)照組，計(jì)算卵巢癌及子宮內(nèi)膜癌組ROC-AUC，子宮內(nèi)膜癌組ROC-AUC為0.931，卵巢癌組ROC-AUC為0.869，說明HE4在鑒別子宮內(nèi)膜癌與子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢癌與卵巢良性疾病中均具有很高的診斷意義，這與Nolen等學(xué)者的研究結(jié)果一致。在卵巢癌的診斷中若能聯(lián)合檢測(cè)CA125，根據(jù)絕經(jīng)狀態(tài)，計(jì)算出ROMA值，更有利于卵巢癌的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。 　　

　　若以0一140pmol/L作為生物參考區(qū)間時(shí)，本研究中檢測(cè)的126例非癌標(biāo)本特異性為，均遠(yuǎn)遠(yuǎn)的低于此參考值上限。本研究通過繪制受試者工作特征曲線，在約登指數(shù)大的點(diǎn)篩查實(shí)驗(yàn)的效果好，在鑒別診斷卵巢癌與卵巢良性疾病時(shí)，HE4的佳判讀值為86.02，在鑒別診斷子宮內(nèi)膜癌與子宮內(nèi)膜異位癥時(shí)，HE4的佳判讀值為74.6，而此時(shí)的特異性也均為。說明適當(dāng)?shù)慕档脱錒E4的生物參考區(qū)間，可以在不降低特異性的情況下提高檢測(cè)的敏感性，所以建議實(shí)驗(yàn)室通過大樣本的檢測(cè)，建立合理的人附條分泌蛋白生物參考區(qū)間，以提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。 　　

　　本研究分析了電化學(xué)發(fā)光法和酶免法兩種檢測(cè)方法的差異，結(jié)果示同一樣本ECLIA法檢測(cè)值高于ELISA法檢測(cè)值。通過比較兩種方法鑒別診斷卵巢癌的ROC-AUC，得知ECLIA法的曲線下面積更大，說明ECLIA法的診斷準(zhǔn)確性高于ELISA法。 　　

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