Survivin在膽管癌組織中的表達(dá)及其與VEGF關(guān)系的相關(guān)研究

 
　　作者：孫智勇,智緒亭　　作者單位：1山東大學(xué)齊魯醫(yī)院　普外科　(山東　濟(jì)南)

　　【摘要】目的： 探討凋亡抑制蛋白Survivin在膽管癌組織中的表達(dá)及其與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表達(dá)的關(guān)系。方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定51例膽管癌組織和10例正常膽管組織的Survivin和VEGF的表達(dá)水平。結(jié)果：1)膽管癌組織中，Survivin陽(yáng)性表達(dá)率為74.5%，正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為0，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);Survivin在膽管癌中的表達(dá)與患者的性別和年齡、腫瘤的分化程度和部位、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。2)VEGF在膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.4%，在正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為20%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01); VEGF在膽管癌中的表達(dá)與患者的性別和年齡、腫瘤的分化程度和部位無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性(P<0.05)，轉(zhuǎn)移組高于無(wú)轉(zhuǎn)移組。3)Survivin和VEGF在膽管癌組織中陽(yáng)性表達(dá)的比率均為70.6%，二者的表達(dá)密切相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論： Survivin和VEGF在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，二者在腫瘤血管生成過(guò)程中密切相關(guān)，為膽管癌的診斷和靶向基因治療提供新的途徑。

　　【關(guān)鍵詞】 膽管腫瘤•Survivin•血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子•免疫組織化學(xué)

　　ex[x]pression of survivin in cholangiocarcinoma and its relation to VEGF

　　SUN Zhi-yong1,2, ZHI Xu-ting1

　　1Department of General Surgery, Qiliu Hospital of Shandong Univeristy (Jinan 250012, China)

　　2Department of General Surgery, Heze People’s Hospital(Heze 274031,China)

　　【ABSTRACT】 ob[x]jective: To investigate the ex[x]pression of survivin and VEGF in cholangiocarcinoma and explore its relation with clinicobiological behavior. Methods: Immunohistochemical techique was adopted in detecting the survivin and VEGF ex[x]pression in cholangiocarcinoma and normal bile duct tissues. 51 samples of cholangiocarcinoma were collected in Qilu Hospital of Shandong University from January 2003 to December 2005 , and served as the test group, and 10 samples of normal bile duct tissues as control group. Results: 1) The ex[x]pression rate of survivin in cholangiocarcinoma was 74.5%, whereas in normal bile duct tissue was 0%, the difference was markablely significant (P<0.01). The ex[x]pression of Survivin in cholangiocarcinoma was not significantly associated with sex, age, tumor differentiation, tumor location and lymph node me[x]tastasis (P>0.05). 2) The ex[x]pression rate of VEGF in cholangiocarcinoma was 80.4%, whereas in normal bile duct tissue was 10%, the difference was significant (P<0.01). The ex[x]pression of VEGF in cholangiocarcinoma was significantly associated with lymph node me[x]tastasis (P<0.05), but not with sex, age, tumor differentiation, tumor location (P>0.05) . VEGF ex[x]pression of the patients with lymph node me[x]tastasis was higher than that of group without lymph node me[x]tastasis. 3) The ex[x]pression of both survivin and VEGF, and was 70.6% in the same sample. Conclusion: Survivin and VEGF may play an important role in tumor genesis, tumor progression, infiltration and me[x]tastasis of cholangiocarcinoma, and with intimate relation in angiogenesis.

　　【KEYWORDS】 Cholangiocarcinoma•Survivin•Vascular endothelial growth factor•Immunohistochemistry

　　膽管癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，發(fā)病率有逐漸增加的趨勢(shì)[1]。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們已能在基因水平上了解癌基因及相關(guān)因子的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。Survivin是新近發(fā)現(xiàn)的一種凋亡抑制基因，屬于凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成員，在腫瘤形成過(guò)程中與細(xì)胞凋亡的抑制、細(xì)胞增生及血管生成密切相關(guān)，是腫瘤預(yù)后不良的標(biāo)志。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一種的重要和強(qiáng)的促血管生成因子，其在多種腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良密切相關(guān)。本研究應(yīng)用SP免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膽管癌組織中Survivin和VEGF的表達(dá)，并探討二者在膽管癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。

　　1　資料與方法

　　1.1　一般資料　選取山東大學(xué)齊魯醫(yī)院普外科2003年1月—2005年12月臨床資料完整的51例膽管癌切除術(shù)后存檔蠟塊為實(shí)驗(yàn)組，所有組織均經(jīng)病理組織學(xué)診斷為膽管癌，其中男37例，女14例;年齡35～74歲，平均年齡56.1歲;高分化10例，中分化25例，低分化16例;膽管腺癌48例，黏液腺癌1例，黏液細(xì)胞癌1例，鱗癌1例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。另取同期10例膽管結(jié)石手術(shù)患者的經(jīng)病理組織學(xué)檢查證實(shí)為無(wú)癌變的正常膽管組織作對(duì)照組。

　　1.2　主要試劑　兔抗人Survivin多克隆抗體、兔抗人VEGF多克隆抗體和即用型免疫組織化學(xué)超敏VltrasensitiveTM SP試劑盒均購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

　　1.3　實(shí)驗(yàn)方法　采用VltrasensitiveTM SP免疫組織化學(xué)染色法，所有標(biāo)本均用10%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片3張，厚度為4 μm。常規(guī)脫蠟、水化，抗原修復(fù)，內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷10 min，非免疫性山羊血清室溫下孵育10 min。一抗室溫下孵育60 min，二抗室溫下孵育10 min，鏈霉素抗生素物素-過(guò)氧化物酶溶液室溫下孵育10 min。DAB溶液顯色5 min，蘇木精復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

　　1.4　結(jié)果判斷　Survivin表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞;在400倍光學(xué)顯微鏡下至少觀察5個(gè)視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>5%定為陽(yáng)性表達(dá)，≤5%為陰性表達(dá)。VEGF表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>10%定為陽(yáng)性表達(dá)，≤10%為陰性表達(dá)。

　　1.5　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理　采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。χ2檢驗(yàn)用于檢驗(yàn)Survivin和VEGF在膽管癌與在正常膽管組織表達(dá)的關(guān)系，二者的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系，及二者表達(dá)的相關(guān)性;Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn)用于檢驗(yàn)Survivin和VEGF在膽管癌中表達(dá)的相關(guān)性。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2　結(jié) 果

　　2.1　Survivin和VEGF在兩組組織中表達(dá)的比較　Survivin在膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為74.5%，而在正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為0，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);VEGF在膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為80.4%，而在正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為20%，兩者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

　　2.2　Survivin和VEGF在膽管癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系　Survivin在膽管癌組織中的表達(dá)與患者的性別和年齡、腫瘤的分化程度和部位、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05);VEGF在膽管癌組織中的表達(dá)與患者的性別和年齡、腫瘤的分化程度和部位無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)，但有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率高于無(wú)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)。

　　2.3　Survivin在膽管癌組織中的表達(dá)與VEGF表達(dá)的相關(guān)性　在膽管癌組織中Survivin和VEGF均陽(yáng)性表達(dá)的比率為70.6%(36/51))，兩者均陰性表達(dá)的比率為15.7%(8/51)，經(jīng)列聯(lián)表資料的χ2檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理證實(shí)二者的表達(dá)密切相關(guān)(χ2=8.9，r=0.678，P<0.01)。

　　3　討 論

　　細(xì)胞凋亡是機(jī)體重要的生理過(guò)程，對(duì)維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定有至關(guān)重要的意義，細(xì)胞凋亡嚴(yán)重失衡對(duì)機(jī)體具有破壞性影響。促凋亡基因活性受抑制和抗凋亡基因被激活是腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)期存活的主要原因。Survivin是近來(lái)經(jīng)效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1 cDNA在人類基因組庫(kù)的雜交篩選中分離并克隆出來(lái)的一種細(xì)胞IAP，既具有與IAP其他分子的同源序列，同時(shí)又表現(xiàn)出獨(dú)特的生物學(xué)特性。有研究表明Survivin 基因表達(dá)具有高度特異性，其在腫瘤組織中廣泛表達(dá)，且表達(dá)水平與腫瘤惡性程度和患者的預(yù)后密切相關(guān)[2-4]。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在膽管癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常膽管組織中，提示在膽管癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，Survivin過(guò)度表達(dá)可抑制膽管癌細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分裂、增殖，破壞細(xì)胞增殖與凋亡的平衡，大量癌細(xì)胞無(wú)限制增殖。另一方面，Survivin的高表達(dá)也抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤血管的生成。Survivin的表達(dá)與患者的性別和年齡、腫瘤的分化程度和部位及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯關(guān)系;但隨著腫瘤惡性程度的增高，Survivin的表達(dá)有逐漸增加的趨勢(shì)，可以推斷Survivin在膽管癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

　　血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的必備條件，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。VEGF是一種高度特異性的血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂素，被為重要和強(qiáng)的促血管生成因子，能刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移，促使腫瘤血管生成[5-6]。本研究發(fā)現(xiàn)，膽管癌組織中VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率為80.4%，而在正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為20.0%;VEGF在膽管癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤的分化程度、腫瘤的部位無(wú)明顯關(guān)系，而與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，提示VEGF在膽管癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮重要作用。Survivin在腫瘤中的高表達(dá)同時(shí)也抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)腫瘤血管生成，從而促使腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[7-9]。本研究結(jié)果顯示，在膽管癌組織中Survivin和VEGF存在協(xié)同表達(dá)關(guān)系，具有正相關(guān)性，提示兩者共同作用，既可抑制膽管癌細(xì)胞凋亡，又可促進(jìn)腫瘤血管生成，從而促進(jìn)膽管癌病變的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。

　　Survivin僅特異地表達(dá)于腫瘤組織，在正常成熟組織中幾乎不表達(dá)，使得應(yīng)用Survivin特異性抗體免疫治療以及反義Survivin基因治療具有良好的靶向性、特異性和安全性。VEGF及其受體也為腫瘤的藥物治療和基因治療提供了特異性較高的靶點(diǎn)。Survivin和VEGF的聯(lián)合檢測(cè)將為膽管癌的診斷和靶向治療提供新的途徑，針對(duì)二者的基因治療將具有良好的前景。