未分化甲狀腺癌57例臨床病理特征及相關(guān)基因突變研究

        未分化甲狀腺癌57例臨床病理特征及
        相關(guān)基因突變研究
        Clinicopathological characteristics and molecular mechanism of anaplastic thyroid cancer in 57 cases. SHI Xiao-guang*, NI Mei-qi, LjU Ting-ting, WANG En-hua, /UO Ya-hong} YANG Xiang-hong, DUJianjing, SHAN zhong-yarb TENG Wei-ping. *The Endocrine Institute and the Liaoning Provincial Key Laboratory of Endocrine Diseases , Department of Endocrinology and me[x]tabolism, the First Hospital of China Medical University, Shenyang l i oOOi, China Keywords : anaplastic thyroid cancer; clinicopathological characteristics; molecular mechanism;
        據(jù)統(tǒng)計，甲狀腺癌是近年來發(fā)病率增加快的惡性腫瘤之一。其中未分化甲狀腺癌(ATC)僅占所有甲狀腺癌的1.7%，但它是導(dǎo)致甲狀腺癌相關(guān)死亡的主要原因。ATC生存時間平均為5-6個月，1年生存率僅為20%。美國癌癥聯(lián)合會fAJCC）的TNM系統(tǒng)將ArC分為ⅣfA、B、C）期，宜盡快實施相應(yīng)的處理。ATC臨床表現(xiàn)各不相同，病理特點變化多樣，而且，其分子機制也不明確。本研究主要探討了ATC患者的臨床病理特征，同時還檢測了腫瘤標(biāo)本中BRAF和TERT啟動子基因突變，分析其關(guān)系。 
        1 資料和方法 
        納入2000-2014年在中國醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院、遼寧省腫瘤醫(yī)院及大連醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院行甲狀腺全切術(shù)的57例ATC.患者。獲取腫瘤石蠟切片和臨床病理學(xué)資料，包括腫瘤的甲狀腺外侵襲情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移和腫瘤分期等。ATC.腫瘤病理診斷遵從世界衛(wèi)生組織的標(biāo)準(zhǔn)，腫瘤分期參照AJCC現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)。 腫瘤石蠟切片經(jīng)二甲苯處理和蛋白酶K消化后，用標(biāo)準(zhǔn)酚一氯仿提取術(shù)和乙醇沉淀法將DNA從消化后的組織中進行分離，TE緩沖液稀釋后冷凍保存統(tǒng)一測序。 應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCPL)對標(biāo)本DNA進行擴增。BRAF基因弓I物序列為：5 -TCAT AATGCTTCJC.TCTGATAGGA-3（正向）和5’_GGCCAAAAATrTTAATCACJTCJGA-3'(反向)。TERT啟動子基因引物序列為：5'-ACJTGCATTCCCGCGCACA(;A-3’(正向）和5’-CACCCJCTGC.CTGAAACTC-3’(反向)。擴增后的PCR產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳確定后經(jīng)過Big Dye循環(huán)反應(yīng)后使用Sanger's測序法進行直接測序(ABIPRISM3730基因測序儀，加拿大1。 采用SPSS 16.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。分類數(shù)據(jù)采用頻率和百分?jǐn)?shù)表示，連續(xù)變量應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。分類變量的統(tǒng)計應(yīng)用X-檢驗，連續(xù)變量的統(tǒng)計應(yīng)用f檢驗。P值采用雙側(cè)檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 
        2結(jié)果
        在57例樣本中，平均診斷年齡為(63.4±12.7)歲，男21例f 36. 80-/0)，女36例(63.2%)。腫瘤直徑為(5.9±2.7) cm，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(數(shù)據(jù)缺失15例) 33例(78.6%)，甲狀腺外浸潤（數(shù)據(jù)缺失4例）4l例(77.4%)，遠處轉(zhuǎn)移（數(shù)據(jù)缺失l例）10例(17.9%)。 在57例樣本中，TERT啟動子突變共20例(35.1%)，其中TERT C228T有18例(31.6%)，TERTC250T有2例(3.5%)，而且這兩種突變相互獨立：BR。4F V600E突變有7例f1 2.3%）。 
        由于TERTC250T突變十分罕見，我們重點分析更為常見的TERT C228T突變。我們在6個病例(10.5%)中發(fā)現(xiàn)了TERT C228T和BRAF V600E突變共存的現(xiàn)象。TERT C228T在BR。4F V600F.陰性病例的比例是12/50(24.0%)，在BRAF V600L’陽性病例的比例為6/7(85.7%)BRAF V600E在TERT C228T陰性病例的比例是1/39(2.6%)，在TERT C228T陽性病例比例是33.3%(6/18，OR 19.0 (95%C1 2.1-173.9.P=0.003)，二者存在關(guān)聯(lián)。TERT C228T和BRAFV600E突變與臨床病理特征未見顯著關(guān)聯(lián)。 
        3討論
        近年來甲狀腺癌的分子機制研究有了很大進展。既往文獻報道在ATC中存在許多基因突變，包括BRAF、RA5、PIK3CA、PTEⅣ和P53基因等，它們主要通過激活MAPK和Pl3k通路從、而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生l21。在人類甲狀腺腫瘤中.BRAF基因突變是MAPK通路異常激活的主要因素，其中BRAFV600E是已知的經(jīng)典的遺傳學(xué)改變：本研究發(fā)現(xiàn)在中國ATC.患者中BRAF V600E的發(fā)生率為12.3%，與其他研究結(jié)果相似。 
        近來端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(TFRT)啟動子突變備受關(guān)注，它可能在ATC的腫瘤形成中扮演著重要角色。TERT常通過添加端粒重復(fù)序列(TAAGGG)來保持染色體長度，從而提高細胞的永生程度，并且還能促進細胞增殖，減少凋亡。TERT C228T和TERTC250T突變是常見的兩種類型。本研究證實它們的發(fā)生率分別是31.6%和3.5%．這兩種突變相互獨立，而日．TERT C228T和BRAF V600E突變之間存在著關(guān)聯(lián)(OR 19.0，95%0.1 2.1-173.9 ,P=0.003)。BRAF V600E突變在甲狀腺癌侵襲性方面起到關(guān)鍵作用已被廣泛證實，近來有報道TERT C228T和BRAF V600E的共存與甲狀腺乳頭狀癌的侵襲性相關(guān)，二者共存在黑素瘤中也很常見。因此，兩個突變之問的協(xié)同作用可能是促進人類腫瘤發(fā)生和侵襲 的普遍機制。 
        本研究中還就TERT C228T和BRAF V600E突變與侵襲性病理特征進行了分析，盡管它們與診斷年齡、遠處轉(zhuǎn)移有相關(guān)的趨勢，但是都沒有得到統(tǒng)計學(xué)差異，可能是由于研究納入的樣本量較小所致。 
        總之，本研究系統(tǒng)描述了ATC患者TERT與BRAF突變的特點和臨床病理特征，證明了TERTC228T與BR。_lF V600E突變之間的關(guān)聯(lián)，為進一步研究ATC的發(fā)生機制提供理論依據(jù)。 
        參考文獻 
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        2015-12-20收集 2016-02-10修回本文編輯:高森