尿道及其他顯色培養(yǎng)基快速分離鑒定常見泌尿道感染致病菌的臨床應(yīng)用

           〖JP2〗尿路感染是僅次于呼吸系統(tǒng)感染的第二大感染性疾病,國內(nèi)外研究均表明，尿路感染的病原菌主要是以革蘭陰性桿菌為主[1-3]。尿路感染是革蘭陰性桿菌侵入血流的主要途徑之一，尿路感染的并發(fā)癥革蘭陰性桿菌敗血癥[4]。革蘭陰性桿菌(GNB) 敗血癥是機(jī)體的嚴(yán)重感染,病死率高達(dá)22.7%～40%。為防止尿路感染的并發(fā)癥——革蘭陰性桿菌敗血癥發(fā)生，對(duì)尿路感染的關(guān)鍵在于早診斷、早治療[5]?，F(xiàn)〖JP〗將3 606 例利用尿道顯色培養(yǎng)基分離鑒定常見泌尿道致病菌[6],現(xiàn)報(bào)告如下。
 

           1資料與方法

           1.1菌株來源：分離培養(yǎng)自2012年6月~2013年6年我院按臨床標(biāo)本采集要求送檢的住院及門診尿液培養(yǎng)標(biāo)本，去除同一患者所獲重復(fù)菌株。共收集標(biāo)本3 606份尿液培養(yǎng)標(biāo)本，患者年齡1~103歲，其中男2 036份，女1 570份。

           1.2儀器與試劑：①儀器采用法國生物梅里埃公司ATBE xpression自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀及配套的鑒定藥敏相關(guān)試條、試劑。 ②血平板、麥康凱平板、尿道顯色平板、酵母樣真菌顯色平板、氧化酶、凝固酶、觸酶試劑等均購自法國梅里埃公司。 ③標(biāo)準(zhǔn)參考菌株購自廣東省臨床檢驗(yàn)中心，分別為大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌A TCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853、糞腸球菌ATCC29212。

           1.3方法：按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第3版尿培養(yǎng)的方法[7]，用一次性尿液定量接種環(huán)接種尿液標(biāo)本于血平板、麥康凱平板、尿道顯色平板、酵母樣真菌顯色平板后，在35℃放置24 h，觀察菌落形態(tài)、顏色、計(jì)數(shù)和 /或涂片、革蘭染色，革蘭陰性桿菌菌落計(jì)數(shù)>105 CFU/ml、革蘭陽性球菌計(jì)數(shù)>104 CFU/ml 者為泌尿道感染,菌落計(jì)數(shù)未達(dá)到以上標(biāo)準(zhǔn)需結(jié)合尿常規(guī)和臨床癥狀綜合分析[8]，按顯色平板說明判斷常見泌尿道致病菌[9]，用ATBex[x]pression自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行驗(yàn)證。
 

           2結(jié)果
           2.1菌株分布：2012年6月~2013年6月尿培養(yǎng)分離的病原菌分布：大腸埃希菌461株(49.1%);肺炎克雷伯菌83株(8.9%);糞腸球菌83株(8.9%) ;奇異變形桿菌53株(5.6%);普通變形桿菌49株(5.2%);陰溝腸桿菌26株(2.8%);產(chǎn)氣腸桿菌21株(2.2%);屎腸球菌15株(1.6%);鶉雞腸球菌11株(1.2%);銅綠假單胞菌10株( 1.1%);洋蔥假單胞菌9株(1.0%);惡臭假單胞菌8株(0.9%);金黃色葡萄球菌8株(0.86% );表皮葡萄球菌7株(0.8%);腐生葡萄球菌6株(0.7%);白色念珠菌6株(0.6%);熱帶念珠菌5株(0.5%);光滑念珠菌2株(0.2%);阿薩絲胞酵母1株(0.1%);其他病原菌21株(2. 14%)。

           2.2直接在顯色培養(yǎng)基鑒定的致病菌與經(jīng)ATB鑒定儀驗(yàn)證結(jié)果. 2.3比較兩種鑒定方法的一致性：采用Kappa一致性檢驗(yàn)分析兩種方法對(duì)常見泌尿道感染致病菌鑒定的一致性(K=0.779)，認(rèn)為兩種方法對(duì)常見泌尿道感染致病菌鑒定結(jié)果一致性好。 
           3討論

           顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應(yīng)的顯色底物是由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成，在特異性酶作用下，游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色，直接觀察菌落顏色即可對(duì)菌種作出鑒定[10-11]。尿道及其他顯色培養(yǎng)基，能快速鑒定常見泌尿道感染的致病菌，且與ATB儀鑒定總的相符率為96%，采用Kappa一致性檢驗(yàn)，K=0.779，兩種方法對(duì)常見泌尿道感染致病菌鑒定結(jié)果一致性好。雖然《抗菌藥物臨床應(yīng)用管理辦法》(衛(wèi)生部令第84號(hào))已于2012年2月13日經(jīng)衛(wèi)生部會(huì)議通過，自2012年8月1日施行。根據(jù)抗菌藥物的安全性、療效、細(xì)菌耐藥性、價(jià)格等因素，將抗菌藥物分三級(jí)：非限制性使用級(jí)、限制性使用級(jí)與特殊使用級(jí)。二級(jí)以上醫(yī)院應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際需要，建立符合實(shí)驗(yàn)室生物安全要求的臨床微生物室。使用限制性使用級(jí)抗菌藥物治療的住院患者抗菌藥物使用前微生物檢驗(yàn)樣本送檢率不低于50%，使用特殊使用級(jí)抗菌藥物治療的住院患者抗菌藥物使用前微生物檢驗(yàn)樣本送檢率不低于80%。由于微生物檢驗(yàn)收費(fèi)低、試劑成本貴、操作繁瑣、鑒定時(shí)間長，造成微生物檢驗(yàn)報(bào)告時(shí)間(TAT)長，影響臨床抗菌藥物實(shí)際應(yīng)用，很多基層醫(yī)院都不想開展微生物檢驗(yàn)，如基層醫(yī)院能靈活應(yīng)用顯色培養(yǎng)基，即節(jié)省部分鑒定試劑成本，又縮短鑒定時(shí)間，保證了微生物檢驗(yàn)報(bào)告的時(shí)效性。因15%的泌尿道感染致病菌是混合感染，為大腸埃希菌和糞腸球菌，如不用顯示培養(yǎng)基，只用單一的血平板，因桿菌大且生長得快，會(huì)將糞腸球菌掩蓋，認(rèn)為只有一種桿菌生長，即鑒定不好且又藥敏試驗(yàn)錯(cuò)誤，誤導(dǎo)臨床用藥及以后的經(jīng)驗(yàn)性用藥。要把精力放在微生物培養(yǎng)上，不能在一個(gè)血平板上接種2份標(biāo)本，且要增加接種培養(yǎng)基的種類，避免漏檢。如忽視培養(yǎng)而將重點(diǎn)放在鑒定上，再好的儀器都沒用，因培養(yǎng)不到或是混合培養(yǎng)，導(dǎo)致錯(cuò)誤的鑒定。錯(cuò)誤的鑒定導(dǎo)致錯(cuò)誤的藥敏試驗(yàn)，形成抗生素耐藥假象，造成抗生素的浪費(fèi)。細(xì)菌的鑒定要結(jié)合顯示培養(yǎng)基、血平板、藥敏試驗(yàn)等綜合判斷，才能為臨床用藥及以后的經(jīng)驗(yàn)性用藥提供科學(xué)的理論依據(jù)。所有的檢驗(yàn)方法都有他的局限性，尿道及其他顯色培養(yǎng)基只對(duì)常見的泌尿道感染的致病菌，其他的如洋蔥假單胞菌、摩根摩根菌、產(chǎn)氣腸桿菌等需要細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定。由于微生物不只存在于人體特定的感染部位，外界環(huán)境及人體的正常菌群等均會(huì)影響微生物檢驗(yàn)結(jié)果。標(biāo)本質(zhì)量是保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的根本，其中分析前質(zhì)量控制是發(fā)生檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤概率高，由于存在標(biāo)本質(zhì)量不良的隱匿性、難控制性，凸顯了標(biāo)本的正確留取的重要性，日常工作密切聯(lián)系臨床，醫(yī)、技、護(hù)和諧溝通，進(jìn)行全程質(zhì)量控制。
 

           4參考文獻(xiàn)

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           [收稿日期：2014-01-10編校：徐強(qiáng)]