單精子卵漿內(nèi)注射應(yīng)用于前周期常規(guī)體外受精失敗和低受精的治

　　【摘要】 目的: 分析常規(guī)體外受精(IVF)完全受精失敗和低受精隨后周期行單精子卵胞漿內(nèi)注射(ICSI)的臨床結(jié)果。方法: 2001年10月至2007年5月，30例IVF完全不受精和12例IVF低受精不育夫婦分別在隨后周期采取38個周期(A組)和17個周期(B組)ICSI治療，同期因男性因素行第1周期ICSI治療的281個周期作為對照(C組)，比較三組的正常受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、胚胎種植率和臨床妊娠率。結(jié)果: 三組間正常受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和臨床妊娠率差異均無顯著性;A組的胚胎種植率為14.3%，明顯低于B組和C組(29.5% 和26.0%，P均<0.05)。結(jié)論: IVF低受精患者在隨后周期改行ICSI可獲得理想的臨床治療效果，IVF完全受精失敗患者隨后周期改行ICSI的胚胎種植率較低，表明其完全受精失敗至少部分原因是由于卵子異常而導(dǎo)致胚胎發(fā)育潛能的下降。
　　【關(guān)鍵詞】 受精 體外 精子注射 細胞質(zhì)內(nèi) 胚胎移植

　　The clinical outcomes of ICSI in patients with previous fertilization failure or low fertilization rate after conventional IVF ZHOU Wei，HUANG Xue-feng，ZHOU ying，ZHANG Wei，XIAO Shi-quan. Reproductive Medicine Center，the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，Wenzhou，325000

　　Abstract: ob[x]jective: To analyze the clinical outcomes of ICSI in patients with previous fertilization failure or low fertilization rate after conventional IVF. Methods: From Oct. 2001 to May. 2007， 38 ICSI cases with previous total fertilization failure after conventional IVF were allocated to group A. 17 ICSI cases with previous low fertilization rate after conventional IVF were allocated to group B. And 281 ICSI cycles for male factor infertility in the same period were allocated to group C as control group. The fertilization rate，high quality embryo rate，implantation rate and clinical pregnancy rate of three groups were retrospectively analyzed. Results: There were no significant differences in fertilization rate，high quality embryo rate and clinical pregnancy rate among three groups，but implantation rate of group A (14.3%) was significantly lower than that of group B and C(29.5% and 26.0%). Conclusion: For patients who have previous low fertilization rate after conventional IVF，ICSI is a good choice to improve clinical outcomes. But for patients who have previous total fertilization failure after conventional IVF，the implantation rate of ICSI embryos is lower than that of the others. It suggests fertilization failure be due at least partly to occyte abnormity，which results in the descent of embryo development potential.

　　Key words: fertilization，in vitro;sperm injection，intracytoplasmic;embryo transfer

　　約5%～10%的常規(guī)體外受精(conventional in vitro fertilization，IVF)治療周期出現(xiàn)完全受精失敗和低受精[1]，其原因常常難以明確。盡管隨后周期采用單精子卵胞漿內(nèi)注射(intracytoplasmic sperm injection，ICSI)?？杀苊馐芫。M一步的臨床結(jié)果仍有爭議。本中心自2001年10月至2007年5月共對30例IVF完全不受精和12例IVF低受精不育夫婦分別在隨后周期采取38個周期和17個周期的ICSI治療，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。
　　1 資料和方法
　　1.1 研究對象 2001年10月至2007年5月，30例IVF完全不受精和12例IVF低受精(受精率低于25%)不育夫婦分別在隨后周期采取38個周期(A組)和17個周期(B組)ICSI治療，兩組的男方精液正常(WHO分析標準)。將同期因男性因素采用射精精子行第1周期ICSI治療的連續(xù)281個周期作為對照(C組)，男性因素的標準為精子密度<10×106/ml，活動率<30%。三組均除外獲卵數(shù)少于5個的病例，以避免隨機的IVF受精失敗。
　　1.2 方法

　　1.2.1 促排卵方案、卵泡監(jiān)測、陰道B超取卵、精液處理、IVF受精和ICSI的操作及胚胎培養(yǎng)觀察的過程均按本中心常規(guī)方法進行[2，3]。
　　1.2.2 優(yōu)質(zhì)胚胎評估：取卵后第2～第3天根據(jù)卵裂球大小、形態(tài)、碎片進行評分。其中A級：卵裂球大小均勻或輕度不均，無核碎片≤5%;B級：卵裂球大小均勻或輕度不均，無核碎片≤20%。將培養(yǎng)2 d細胞數(shù)≥3個的和培養(yǎng)3 d細胞數(shù)≥6個的A、B級胚胎定義為優(yōu)質(zhì)胚胎[4]。
　　1.2.3 胚胎移植和妊娠試驗：取卵后第2或第3天，選擇質(zhì)量好的胚胎，每周期移植≤3個胚胎。所有患者取卵日起給予黃體支持，胚胎移植2周后檢查血清人絨毛膜促性腺激素(hCG)含量，5周后B超檢查確認有無胎心。
　　1.3 統(tǒng)計學處理方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析，多組均數(shù)間的比較采用方差分析，率的比較采用x2檢驗。
　　2 結(jié)果

　　三組的注射hCG日E2、子宮內(nèi)膜厚度差異無顯著性。A、B組的女方年齡、不孕年限及基礎(chǔ)FSH值均高于C組(均P <0.01)。A組的獲卵數(shù)少于C組(P <0.01)，B組的獲卵數(shù)與C組比差異無顯著性。A組的卵子成熟率低于B、C組(P <0.05，P <0.01)。詳見表1。A、B組的原發(fā)不孕癥分別占73.3%(22/30)和41.7%(5/12)。
　　ICSI治療結(jié)果見表2。三組正常受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率和臨床妊娠率差異均無顯著性，A組的胚胎種植率明顯低于B和C組(P均<0.05)。
　　3 討論

　　人類受精過程包括頂體完整的精子與透明帶結(jié)合、透明帶上糖蛋白誘導(dǎo)頂體反應(yīng)、精子穿透透明帶并溶解卵膜、卵子激活和原核形成等過程。上述過程中任何一個步驟的異常都可能導(dǎo)致受精失敗。研究表明，常規(guī)IVF受精失敗55%是由于精子穿透失敗和穿透異常造成，而卵母細胞激活失敗占15.1%，原核形成障礙占19.2%[5]。
　　Liu等[6]曾報道，卵子受精失敗與精子-透明帶結(jié)合和透明帶誘導(dǎo)的頂體反應(yīng)異常有關(guān)，并認為透明帶不能誘導(dǎo)正常的頂體反應(yīng)是低受精的一個主要原因。本研究中，IVF低受精率患者在隨后周期行ICSI治療的受精率、臨床妊娠率和胚胎種植率與因男性因素行ICSI治療者相似，這提示其低受精的原因可能只是精卵結(jié)合障礙，而ICSI治療可以直接跨越精卵結(jié)合障礙，避免了受精失敗，從而改善了治療結(jié)果，對于低受精患者來說是一個很好的選擇。
　　本研究資料顯示，盡管完全受精失敗組患者在隨后周期行ICSI的受精率、卵裂率、優(yōu)質(zhì)胚胎率與對照組和低受精組差異均無顯著性，但其種植率顯著降低。這與Tomas等[7]和Borini等[8]的報道一致，他們發(fā)現(xiàn)有受精失敗史的病例進行ICSI時的妊娠率與種植率均低于男性因素不育病例。Borini等[8]發(fā)現(xiàn)，盡管IVF受精失敗患者下一周期行ICSI的妊娠率明顯低于男性因素組，但采用供者的卵子行ICSI，其妊娠率可達到與男性因素患者相似的結(jié)果。同時我們還發(fā)現(xiàn)IVF完全受精失敗的患者多為原發(fā)不孕，女性年齡、不孕年限、基礎(chǔ)FSH值均大于對照組，在隨后周期行ICSI治療中獲卵數(shù)及卵子成熟率較低，這些可能會對卵子質(zhì)量產(chǎn)生一定的影響。還有一些研究認為，IVF未受精的卵母細胞中有1/3的染色體有異常[9]，另外卵母細胞胞漿不成熟[10]及卵母細胞中線粒體某些基因組表達缺陷[11]等因素也可導(dǎo)致IVF受精失敗，它們均有可能影響胚胎發(fā)育潛能，使其不能正常妊娠。因此我們認為完全受精失敗至少部分是由于卵子異常所致，而卵子異常又導(dǎo)致胚胎發(fā)育潛能的下降。
　　總之，我們的研究表明IVF低受精組在隨后周期改行ICSI可獲得理想的臨床治療效果。完全受精失敗組有可能因卵子的某些缺陷危及胚胎的進一步發(fā)育及種植，從而影響ICSI的治療效果。
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