【關(guān)鍵詞】 半薄切片 染色液
電鏡是觀察組織細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的一種手段。但由于切片太小，有時(shí)難于觀察到目標(biāo)結(jié)構(gòu)，為此需大量制備樣品造成工作量大且消耗多。為使超薄切片能精確地切到目標(biāo)部位，在行超薄切片前要做半薄切片進(jìn)行定位。一般是在超薄切片機(jī)上切取數(shù)張１～２ μｍ厚的切片進(jìn)行染色觀察。半薄切片的染色常規(guī)方法有：甲苯胺蘭染色法、天青Ⅱ美蘭染色法、ＨＥ染色法和Ｇｉｅｍｓａ染色法等，無論哪種方法都需預(yù)先做脫樹脂處理，否則染料不宜滲入，影響染色效果。為提高電鏡觀察的準(zhǔn)確性，通過多年實(shí)踐，我們對常用的甲苯胺蘭染色液進(jìn)行了改良，在甲苯胺蘭染色液中適當(dāng)添加硼砂并應(yīng)用于半薄切片的染色［１］，取得了滿意效果，現(xiàn)將方法介紹如下。
１ 材料與方法
取經(jīng)透射電鏡常規(guī)Ｅｐｏｎ８１２樹脂包埋后的組織塊于超薄切片機(jī)上，切片厚度為１～２ μｍ的半薄切片，將其轉(zhuǎn)移至涂有蛋白甘油的載玻片上，與３７℃烘箱內(nèi)烤干。將硼砂甲苯胺蘭染液滴在切片上染色５ min，用蒸餾水沖洗切片上多余的染液，自然干燥，光學(xué)顯微鏡觀察。硼砂甲苯胺蘭染液的配制：分別稱取甲苯胺蘭（北京化工廠生產(chǎn)）１ ｇ ，硼砂１?。纾ㄉ蜿柣瘜W(xué)試劑廠生產(chǎn)），用１００?。恚烊ルx子水先加入硼砂加熱溶解，后加甲苯胺蘭，ＮＯ.１濾紙過濾備用。
２ 結(jié)果
與常規(guī)電鏡半薄切片染色液相比經(jīng)硼砂甲苯胺蘭染色的切片經(jīng)光鏡觀察見組織細(xì)胞核被染成深藍(lán)色，胞漿被染成淡藍(lán)色，結(jié)構(gòu)層次清楚，包埋劑并無著色。
３ 討論
為克服電鏡觀察視野局限的缺點(diǎn)，一般在超薄切片前要進(jìn)行半薄切片以確定所要觀察的結(jié)構(gòu)，染色良好的半薄切片應(yīng)能夠提供石蠟切片難以分辨的細(xì)節(jié)。而常規(guī)的半薄切片染色前，要先行脫樹脂處理，其過程是將干燥切片插入氫氧化鉀無水酒精飽和溶液１０～１５ min后，無水酒精洗三次，經(jīng)梯度酒精下行，水洗后染色。否則染料不宜滲入而影響染色效果［２］。即繁瑣又費(fèi)時(shí)，所以選擇理想的染色劑非常重要。甲苯胺蘭是常用的人工合成染料，有兩個(gè)發(fā)色團(tuán)和兩個(gè)助色團(tuán)。發(fā)色團(tuán)是使染料呈現(xiàn)顏色的基團(tuán)，而助色團(tuán)是能促使染料產(chǎn)生電離成鹽類，幫助發(fā)色基團(tuán)對組織產(chǎn)生染色力的基團(tuán)。甲苯胺蘭是一種堿性染料，其中的陽離子有染色作用。組織細(xì)胞中的酸性物質(zhì)與其中的陽離子結(jié)合而被染色。常規(guī)的甲苯胺蘭染色液是以磷酸緩沖液（ｐＨ７.２）為溶劑呈弱堿性，而硼砂（Ｎａ２Ｂ４Ｏ７·１０Ｈ２Ｏ）水溶液呈強(qiáng)堿性（ｐＨ９.３）。以其代替磷酸緩沖液配制的甲苯胺蘭染色液，大大提高了組織細(xì)胞的著色力。比較改良前后的兩種甲苯胺蘭染色液，改良后的染色液不僅不需脫樹脂等繁瑣步驟而省時(shí)，組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)更清晰。特別適合于臨床活檢標(biāo)本需要在短時(shí)間內(nèi)確定目標(biāo)部位，提高臨床電鏡診斷的準(zhǔn)確性和效率。改良后的染色液在應(yīng)用過程中應(yīng)注意的幾個(gè)問題：①由于溫度對染料的著色力有很大影響，染色過程中可適當(dāng)加溫７０～８０℃，使著色更牢固。②染色后以水洗為好，酒精可使堿性染料脫色所以不能用酒精脫水。③由于改良后的染色液的配制不使用磷酸緩沖液，所以即使長期室溫保存也不產(chǎn)生沉淀。
【參考文獻(xiàn)】
［1］應(yīng)國華．醫(yī)學(xué)·生物學(xué)電鏡技術(shù)與細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)［Ｍ］．香港：香港現(xiàn)代出版社，１９９３．２４－２５．
［2］杭振鑣，蔡文琴．電子顯微鏡術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)的應(yīng)用?。郏停荩貞c：重慶出版社，１９８８．２４－２６．
