HPV E6/E7 DNA檢測，避免漏檢

 目前，市場上HPV（人乳頭瘤病毒）檢測產(chǎn)品眾多，經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準的產(chǎn)品有100多種，檢測方法多樣，根據(jù)檢測靶點、檢測種類不同，檢測結(jié)果也會有所不同。
HPV基因組
HPVs是一種雙鏈的小DNA病毒，具有7900個堿基對，由病毒蛋白外殼和核心DNA物質(zhì)構(gòu)成，無包膜。病毒基因組分為3個部分：早期基因區(qū)（E）、晚期基因區(qū)（L）及將早期區(qū)與晚期區(qū)分開的長調(diào)控區(qū)（LCR）。調(diào)控區(qū)主要調(diào)控病毒的轉(zhuǎn)錄，控制病毒蛋白和感染顆粒的產(chǎn)生。早期區(qū)編碼E6、E7、E1、E2、E4和E5蛋白質(zhì)，主要參與病毒DNA的復制、轉(zhuǎn)錄。晚期區(qū)編碼L1、L2蛋白質(zhì)，分別是病毒的主要和次要衣殼蛋白。早期表達基因E6、E7是致癌基因，編碼病毒癌蛋白，在細胞轉(zhuǎn)化和維持轉(zhuǎn)化組織惡性表型的過程中起著至關(guān)重要的作用[1]。
檢測靶點
目前的檢測方法中，跟進檢測靶點的不同主要分為三種：L1 DNA、E6/E7 DNA、E6/E7 mRNA，不同靶點的檢測區(qū)別如下圖所示：

圖. 子宮頸病變過程中不同靶點的量的變化趨勢
在CIN I 期及之前，HPV 主要以游離狀態(tài)存在于宿主細胞中，在病變進一步發(fā)展的過程中，HPV 基因組會整合到宿主細胞基因組，隨著病變程度的增加，HPV基因組終以整合狀態(tài)存在。在整合發(fā)生之后，L1 DNA 通常丟失，而E6/E7 DNA 無論在病毒游離狀態(tài)還是整合狀態(tài)會一直存在，致癌E6E7 mRNA 也會在基因組發(fā)生整合之后大量表達[2]。
由此可見，以L1基因作檢測靶點，會導致因HPV基因組整合而造成的漏檢；而以E6/E7 mRNA作檢測靶點，會使得檢測窗口延后，不利于HPV感染的早期監(jiān)控。
靶點比較

從低級別病變發(fā)展為癌的過程中，HPV基因組會發(fā)生整合。在整合過程中，E6/E7基因持續(xù)存在，L1基因可能會丟失。在宮頸別病變中，由于基因組的整合會使L1基因有丟失的可能，因此，以L1基因作檢測靶點會對HPV有漏檢的可能。相反，如果檢測靶點設計在E6/E7基因，不管HPV基因組是否發(fā)生整合，都可以檢測出HPV陽性的病人[3]。如果檢測E6/E7，可發(fā)現(xiàn)所有癌癥，包括L1丟失的癌癥[4]。因此，好以致癌基因E6/E7為檢測靶點，以免造成漏檢。
目前經(jīng)過CFDA認證的產(chǎn)品絕大多數(shù)是DNA檢測產(chǎn)品，另外還有mRNA檢測產(chǎn)品。有文獻顯示，相比HPV DNA檢測，mRNA檢測靈敏度稍遜，但是特異性更好?？傮w來說，這些研究均顯示HPV E6/E7 mRNA陽性的情況下，患者病變進一步發(fā)展的可能性較大[5]。但是，mRNA檢測主要是針對14種高危型的檢測，檢測出陽性之后往往需要進一步做分型檢測。另外，目前國際上幾大宮頸癌權(quán)威機構(gòu)頒布的指南里面均是針對HPV DNA檢測后不同型別的處理意見，還沒有mRNA檢測陽性的處理指導。因此，我們在選擇HPV mRNA檢測產(chǎn)品時要保持謹慎態(tài)度。
總之，相較于以L1 DNA和E6/E7 mRNA作檢測靶點，檢測E6/E7 DNA在避免漏檢的同時，能夠保證靈敏度和特異性，更適合作為HPV檢測的靶點。
[1] 胡家昌. 高危型HPVDNA與宿主基因整合及致癌機理的相關(guān)研究進展. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展, 2015, 24(5):384-386
[2] Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide. Journal of Pathology, 1999, 189(1):12
[3] F Karlsen, M Kalantari, A Jenkins, E Pettersen, G Kristensen Use of Multiple PCR Primer Sets for Optimal Detection of Human Papillomavirus. Journal of Clinical Microbiology, 1996, 34(9):2095-2100
[4] W.A.A. Tjalma, C.E. Depuydt. Cervical cancer screening: which HPV test should be used—L1 or E6/E7? European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology 170 (2013) 45–46.
[5] 劉桐宇, 謝榕. 人乳頭瘤病毒E6、E7基因致癌機制及臨床應用進展. 中華生物醫(yī)學工程雜志, 2013, 19(2):172-176