紫花茄皂苷I5對(duì)不同腫瘤細(xì)胞系的體外抗腫瘤作用

作者：曹同濤
　　【摘要】 目的 探討紫花茄皂苷I5對(duì)不同腫瘤細(xì)胞系的體外抗腫瘤作用。方法 用酸性磷酸酶(APA)法檢測(cè)紫花茄皂苷I5對(duì)不同部位人源性腫瘤細(xì)胞株體外生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果 紫花茄皂苷I5對(duì)所試腫瘤細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)皆具有一定的抑制作用，尤其是對(duì)人肝癌BEL7404、人鼻咽癌CNE和人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，抑制率可達(dá)到70%以上。結(jié)論 體外實(shí)驗(yàn)表明紫花茄皂苷I5對(duì)4種不同部位人源性腫瘤細(xì)胞株皆具有一定的抗腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用，敏感細(xì)胞株為肝癌和結(jié)腸癌細(xì)胞。
　　【關(guān)鍵詞】 皂苷 酸性磷酸酶法(APA) 抗腫瘤作用
　　【Abstract】 ob[x]jective To examine the inhibitory effects of saponin I5 in Solanum indicum L. on different tumor cell lines in vitro.Methods Acid phosphatase assay (APA) was adopted to detect the effects of saponin I5 on the growth of tumor cell lines in vitro.Results The solanum saponin had inhibitory effects on every tested tumor cell line.Especially, the growth inhibitory ratio of saponin I5 on the tested tumor cell lines(BEL7404, CNE and HT29)reached above 70%.Conclusion The solanum saponin I5 has inhibitory effects on the growth of tumor cell lines in vitro，and the most sensitive cell line to saponin I5 is hepatocarcinoma cell.

　　【Key words】 saponin, acid phosphatase assay(APA), antitumor effect

　　近年來(lái)隨著分離提取技術(shù)的不斷發(fā)展，多種薯蕷皂苷被分離出來(lái)，并不斷發(fā)現(xiàn)其新的生物活性，特別是在抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、降血脂、抗艾滋病等方面的作用引起了人們的重視[1，2]，我們的前期研究結(jié)果已顯示合成紫花茄皂苷具有一定的抗腫瘤作用，對(duì)人源肝癌BEL7402細(xì)胞株的生長(zhǎng)具有抑制作用，還可誘導(dǎo)BEL7402細(xì)胞的凋亡[3，4]。為了更好的認(rèn)識(shí)紫花茄皂苷I5的抗腫瘤譜，本研究采用4種不同部位人源性腫瘤細(xì)胞株對(duì)紫花茄皂苷I5進(jìn)行體外抗腫瘤篩查，探討其體外抗腫瘤作用。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料

　　1.1.1 主要試劑及儀器 RPMI1640培養(yǎng)基購(gòu)自Gibco BRL公司，DHanks液、PBS緩沖液、0.1%EDTA溶液等均按常規(guī)配制[5,6]，新生牛血清為黑龍江省同江市江海生物公司產(chǎn)品，二氧化碳培養(yǎng)箱(Hereus公司)，96孔細(xì)胞培養(yǎng)板為Nunc公司產(chǎn)品，EL311酶標(biāo)免疫檢測(cè)儀(BioTek公司)，相差倒置顯微鏡(Olympus)。
　　1.1.2 細(xì)胞株 人肝癌BEL7404細(xì)胞系，引自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部細(xì)胞生物學(xué)系。人鼻咽癌CNE細(xì)胞系、人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞系、人大細(xì)胞肺癌NCIH460細(xì)胞系均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞資源中心。
　　1.2 方法

　　1.2.1 藥物及配制：紫花茄皂苷I5由中國(guó)科學(xué)院生態(tài)研究環(huán)境中心生物技術(shù)室提供。皂苷以二甲基亞砜(DMSO)溶解，加入細(xì)胞前用培養(yǎng)液稀釋至1～10 g/ml，其中DMSO高濃度為0.1%。陰性對(duì)照為0.1%DMSO的培養(yǎng)液。
　　1.2.2 酸性磷酸酶法(acid phosphatase assay, APA)[7]體外抗腫瘤譜篩選：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化后制成細(xì)胞懸液，按1×103/孔的密度接種于96孔板。培養(yǎng)24 h后，實(shí)驗(yàn)組加入先用DMSO溶解、再經(jīng)RPMI1640培養(yǎng)液稀釋至終濃度為1～10 μg/ml的皂苷;空白對(duì)照組加入RPMI1640培養(yǎng)液;溶劑對(duì)照組加入經(jīng)同樣稀釋的溶劑，含0.01%～0.1%DMSO。實(shí)驗(yàn)中每個(gè)濃度設(shè)8個(gè)平行孔，作用72 h后用APA法經(jīng)EL311酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在405 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度OD值，空白孔調(diào)零，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，取平均值。按下列公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：生長(zhǎng)抑制率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均OD值/對(duì)照組平均OD值)×。
　　1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)中每組設(shè)平行孔8個(gè)，結(jié)果用平均值表示。使用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)分析軟件包分析統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，方法采用單因素方差分析(OneWay ANOVA)，P<0.05為差異具有顯著性。
　　2 結(jié)果

　　2.1 紫花茄皂苷I5作用后對(duì)腫瘤細(xì)胞形態(tài)的影響 4種不同部位人源性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)72 h后，光鏡下觀察，未給藥組細(xì)胞貼壁并呈梭形或多邊形生長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)目多，鋪滿整個(gè)瓶底，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好。皂苷I5高劑量組細(xì)胞貼壁狀況不好，折光性較差，部分細(xì)胞漂浮在培養(yǎng)液中，活細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組少。
　　2.2 紫花茄皂苷I5體外細(xì)胞抗腫瘤譜篩選 APA法原理是利用活細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性環(huán)境下分解磷酸酶底物硝基苯磷酸鹽，形成淡黃色的產(chǎn)物，用酶標(biāo)儀在405 nm處檢測(cè)吸光度。該方法可用于96孔板培養(yǎng)的各種細(xì)胞，十分簡(jiǎn)便快捷，靈敏度高(可達(dá)100個(gè)細(xì)胞/孔)、重復(fù)性好[7]。
　　各腫瘤細(xì)胞株經(jīng)體外APA法檢測(cè)篩選，紫花茄皂苷I5對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率見(jiàn)表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫花茄皂苷I5敏感細(xì)胞系為人肝癌細(xì)胞株BEL7404、人鼻咽癌細(xì)胞株CNE和人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞，其大抑制率皆達(dá)到70%以上，而對(duì)人大細(xì)胞肺癌NCIH460細(xì)胞的有效濃度從6 μg/ml開(kāi)始，大抑制率僅為50%左右。表1 紫花茄皂苷I5對(duì)不同腫瘤細(xì)胞系的增殖抑制率 注：與空白對(duì)照相比, *P<0.05,△P<0.001

　　3 討論

　　大量研究結(jié)果表明，植物來(lái)源的抗腫瘤藥具有種類多、小、不良反應(yīng)少的特點(diǎn)。因此，從植物中尋找高效的抗腫瘤藥物已成為一種新的研究思路[8]。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者也對(duì)皂苷類藥物的抗腫瘤作用及其作用機(jī)制進(jìn)行了研究。Chiang等[9]證實(shí)從紫花茄中提取的薯蕷皂苷、甲基原皂苷、甲基原薯蕷皂苷、原薯蕷皂苷對(duì)結(jié)腸癌Colo205、鼻咽癌KB、宮頸癌Hela腫瘤細(xì)胞株有殺傷作用。馬朋等[3]報(bào)道，合成紫花茄皂苷在體外可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞BEL7402凋亡。
　　本研究采用多種不同部位的人源性腫瘤細(xì)胞株對(duì)紫花茄皂苷I5的體外抗腫瘤作用進(jìn)行系統(tǒng)觀察，探討其抗腫瘤作用及其可能的敏感腫瘤細(xì)胞株。篩選實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)紫花茄皂苷I5對(duì)所選用的肝癌細(xì)胞株BEL7404和結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29生長(zhǎng)抑制作用較強(qiáng)，其大抑制率皆達(dá)到90%以上;對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞株CNE敏感性其次，大抑制率為70%以上;而對(duì)NCIH460細(xì)胞的敏感性差，有效濃度從6 μg/ml開(kāi)始，大抑制率僅為50%左右，從而提示對(duì)紫花茄皂苷I5較敏感的細(xì)胞株是肝癌細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞。由于肝癌是國(guó)內(nèi)發(fā)病率較高的一類腫瘤，結(jié)腸癌是發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)病率較高的一類腫瘤，我國(guó)的發(fā)病率也日趨升高，深入研究紫花茄皂苷的抗腫瘤作用，對(duì)醫(yī)藥事業(yè)的發(fā)展具有實(shí)用價(jià)值。有關(guān)紫花茄皂苷體內(nèi)藥效的驗(yàn)證將有待于進(jìn)一步的研究。
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