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電針豐隆穴對高脂血癥大鼠一氧化氮和內(nèi)皮素的影響

文章來源:發(fā)布日期:2008-03-07瀏覽次數(shù):71635

【摘要】    目的:探討電針(electroacupuncture, EA)豐隆穴對高脂血癥(hyperlipidemia, HLP)大鼠血脂、一氧化氮(nitric oxide, NO)及內(nèi)皮素(endothelin, ET)含量的影響。方法:將80只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組(飼喂基礎(chǔ)飼料)、模型組(飼喂高脂飼料)、電針治療組(飼喂高脂飼料+電針豐隆治療)、普伐他汀治療組(飼喂高脂飼料+普伐他汀鈉灌胃)。各組20只。30 d后稱取各組大鼠體質(zhì)量,以改良大鼠心臟穿刺采血方法采血,檢測血脂、NO以及ET含量。結(jié)果:與正常對照組比較,模型組大鼠體質(zhì)量、總膽固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triacylglycerol, TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoproteincholesterol, LDLC)和ET水平顯著升高(P<0.05,P<0.01);高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoproteincholesterol, HDLC)、NO水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較,普伐他汀治療組、電針治療組大鼠體質(zhì)量、TC、TG、LDLC水平明顯降低(P<0.01),NO水平顯著升高。普伐他汀治療組HDLC水平顯著升高,而電針治療組升高不明顯,兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。普伐他汀治療組ET水平降低(P<0.05),電針治療組ET水平降低不明顯(P>0.05)。結(jié)論:電針治療和西藥治療均對HLP大鼠血脂具有良性調(diào)節(jié)作用,且能在一定程度上糾正高脂狀態(tài)下NO和ET水平的失衡。西藥對HLP大鼠HDLC有較好的良性調(diào)節(jié)作用,而電針對HLP大鼠HDLC的調(diào)節(jié)作用有限。

【關(guān)鍵詞】  高脂血癥 電針療法 豐隆; 一氧化氮  內(nèi)皮素

  Effect of electroacupuncture at Fenglong (GV 16) on nitric oxide and endothelin in rats with hyperlipidemia

  Li ZHOU, Hongxing ZHANG, Lingguang LIU, Wenjun WAN

  Department of Acupuncture and Moxibustion, Wuhan Chinese and Western Medicine Hospital, Wuhan, Hubei Province 430022, China

  ob[x]jective: To investigate the effect of electroacupuncture (EA) at Fenglong (GV 16) on body weight, blood lipids, nitric oxide (NO) and endothelin (ET) in rats with hyperlipidemia (HLP).

  Methods: Eighty Wistar rats were randomly divided into normal control group (fed normal diet), untreated group (fed a highfat diet), EAtreated group (fed a highfat diet plus EA therapy) and pravastatintreated group (fed a highfat diet plus pravastatin tablet). There were 20 rats in each group. The body weight and the blood content of total cholesterol (TC), triacylglycerol (TG), high density lipoproteincholesterol (HDLC), low density lipoproteincholesterol (LDLC), NO the and ET of the rats in different groups were measured before experiment and after 30day treatment. A modified method of cardiac puncture for blood sampling was used for blood collection.

  Results: Compared with the normal control group, the body weight and the levels of TC, TG, LDLC and ET in the untreated group were significantly elevated (P<0.01, P<0.05), while the levels of HDLC and NO were obviously decreased (P<0.05). The body weight and the levels of TC, TG, LDLC demonstrated significant reduction in pravastatintreated group and EAtreated group as compared with the untreated group (P<0.01), and the NO content in pravastatintreated group and EAtreated group was higher than that in the untreated group (P<0.01). Compared with the untreated group, HDLC level was elevated significantly in pravastatintreated group, while HDLC level in EAtreated group was not changed significantly, and there was significant difference in the HDLC level between pravastatintreated group and EAtreated group (P<0.01). The level of ET was decreased obviously in pravastatintreated group (P<0.05), while the level of ET in EAtreated group was not changed significantly (P>0.05).

  Conclusions: Both EA therapy and pravastatin have efficient regulation of body weight and the content of TC, TG, LDLC and NO in HLP rats. To some extent, they are able to regulate the imbalance between ET and NO content under the condition of HLP. Western medicine such as pravastatin can regulate the HDLC level in HLP rats, while the effect of EA therapy on regulation of the HDLC level is limited.

  Keywords: hyperlipidemia; electroacupuncture; Fenglong; nitric oxide; endothelin

  高脂血癥(hyperlipidemia, HLP)是指血液中一種或多種脂質(zhì)含量超過正常高限的疾病。中醫(yī)學(xué)對于“HLP”的認(rèn)識源于《內(nèi)經(jīng)》的“膏脂學(xué)說”,認(rèn)為其屬于血脈中的病變,為血中之痰濁,由血脈不暢、氣滯血瘀和痰阻脈絡(luò)等經(jīng)絡(luò)氣血的運行失常所致。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為HLP能夠引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷及血管收縮、舒張功能異常,是導(dǎo)致動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)發(fā)生的決定因素[1]。HLP與致AS相關(guān)因素一氧化氮(nitric oxide, NO)、內(nèi)皮素(endothelin, ET)之間存在密切關(guān)系。本課題在前期大樣本、多中心臨床研究的基礎(chǔ)上[2],進(jìn)一步觀察電針豐隆穴對HLP大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用,從而為其臨床療效提供實驗依據(jù)。

  1  材料與方法

  1.1  材料

  1.1.1  動物  160~180 g SPF級健康成年雄性Wistar大鼠80只,由湖北省實驗動物研究中心提供,實驗動物質(zhì)量合格證號:SYXK(鄂)20030014。

  1.1.2  藥品與試劑  普伐他汀鈉片,中美上海施貴寶制藥有限公司,批準(zhǔn)文號為(95)衛(wèi)藥準(zhǔn)字J19;膽固醇,上海試一化學(xué)試劑有限公司,批號為040803;豬膽鹽,成都科龍化工試劑廠,批號為050511;基礎(chǔ)飼料和蛋黃粉由湖北省實驗動物研究中心提供;豬油(自制);ET試劑盒,北京科美東雅生物技術(shù)有限公司,批號為20061125;NO試劑盒,南京建成生物工程研究所分所。

  1.1.3  儀器  LH202H型韓氏穴位神經(jīng)刺激儀(北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開發(fā)公司);Jouan B4i型高速離心機(jī)(法國Jouan Industries S.A.S.公司);Olympus AU2700型全自動生化分析儀(日本Olympus公司);DFM96型多管放射免疫計數(shù)器(合肥眾成機(jī)電技術(shù)公司);-20℃冰箱(海爾冰箱BCD259K/A)。

  1.2  動物及分組  將80只Wistar大鼠隨機(jī)分為4組:正常對照組(飼喂普通飼料),模型組(飼喂高脂飼料),電針治療組(飼喂高脂飼料+電針豐隆穴),普伐他汀治療組(飼喂高脂飼料+普伐他汀鈉灌胃)。每組20只。實驗中有5只大鼠死亡,其中電針治療組3只,普伐他汀治療組2只。

  1.3  造模方法  正常對照組予基礎(chǔ)飼料,其他3組基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后改喂高脂飼料,飼料配方參考中華人民共和國衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)輔助降血脂功能檢驗方法:基礎(chǔ)飼料78.8%、豬油10%、膽固醇1%、豬膽鹽0.2%、蛋黃粉10%,自由喂養(yǎng),連續(xù)喂養(yǎng)30 d。

  1.4  治療方法

  1.4.1  電針治療組  取穴定位參照華興邦介紹的大鼠穴位圖譜[3]及擬人比照法取雙側(cè)“豐隆”穴,選用30號1寸“瑞琪爾”(NATURAL)牌一次性無菌針灸針(中美合資姑蘇針灸器械有限公司),以直角快速刺入,進(jìn)針0.5寸,接LH202H型韓氏穴位神經(jīng)刺激儀,等幅疏密波,電流強度2 mA,頻率2/100 Hz,留針30 min,1次/d,連續(xù)治療30 d。

  1.4.2  普伐他汀治療組  將普伐他汀鈉片溶于蒸餾水中配成1.25 mg/ml懸濁液,參考文獻(xiàn)[4]按20 mg/(kg·d)的劑量灌胃,1次/d,連續(xù)治療30 d。

  1.5  指標(biāo)檢測方法  大鼠麻醉后,采用改良大鼠心臟穿刺采血方法,分別用肝素鈉試管和加入EDTA·Na2 30 μl、4萬U/ml抑肽酶40 μl試管各采血2~3 ml。4 ℃離心10 min(3 000 r/min),取離心后的上層血漿放入2支1.0 ml環(huán)氧樹脂管(EP管)內(nèi),-20℃冰箱保存。采用全自動生化分析儀,測定血漿中總膽固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、高密度脂蛋白膽固醇(highdensity lipoprotein cholesterol, HDLC)和低密度脂蛋白膽固醇(lowdensity lipoprotein cholesterol, LDLC)含量;ET含量采用放射免疫分析法測定,NO含量采用硝酸還原酶法檢測,嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

  1.6  統(tǒng)計學(xué)方法  實驗數(shù)據(jù)用x±s表示,用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件中的方差分析(ANOVA)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

  2  結(jié)果

  2.1  各組大鼠體質(zhì)量  與正常對照組比較,模型組大鼠體質(zhì)量明顯增加(P<0.01);與模型組比較,電針治療組、普伐他汀治療組大鼠體質(zhì)量均明顯減輕(P<0.01),但電針治療組與普伐他汀治療組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

  2.2  各組大鼠血脂含量  與正常對照組比較,模型組大鼠TC、TG、LDLC水平顯著升高(P<0.01),HDLC水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較,電針治療組和普伐他汀治療組TC、TG、LDLC水平均顯著降低(P<0.01),電針治療組和普伐他汀治療組之間TC、TG、LDLC水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與模型組比較,普伐他汀治療組HDLC水平顯著升高(P<0.01),而電針治療組HDLC水平升高不明顯(P>0.05),普伐他汀升高HDLC水平的療效優(yōu)于電針治療組(P<0.01)。見表2。

  2.3  各組大鼠血漿ET和NO含量  與正常對照組比較,模型組NO水平明顯降低(P<0.05),ET水平明顯升高(P<0.05);與模型組比較,電針治療組、普伐他汀治療組NO水平均顯著升高(P<0.01),并且普伐他汀治療組ET水平降低(P<0.05),而電針治療組ET水平降低不明顯(P>0.05)。電針治療組和普伐他汀治療組在調(diào)節(jié)NO、ET方面的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

  表1  各組大鼠體質(zhì)量(略)

  Table 1  Body weight of rats in different groups

  **P<0.01 vs normal control group; △△P<0.01 vs untreated group.

  表2  各組大鼠TC、TG、HDLC及LDLC含量(略)

  Table 2  Content of TC, TG, HDLC and LDLC of rats in different groups

  *P<0.05, **P<0.01 vs normal control group; △△P<0.01 vs untreated group; ▲▲P<0.01 vs pravastatintreated group.
  
  表3  各組大鼠血漿ET、NO含量(略)

  Table 3  Content of plasma ET and NO of rats in different groups

  *P<0.05 vs normal control group; △P<0.05, △△P<0.01 vs untreated group.

  3  討論
   
  血管舒縮運動主要是通過血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的ET、NO等血管活性因子來實現(xiàn)[4]。ET是目前發(fā)現(xiàn)的強的內(nèi)源性縮血管活性多肽[5]。血管內(nèi)皮細(xì)胞主要分泌ET1。在HLP狀態(tài)下存在ET產(chǎn)生通路的活躍,ET1可明顯促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞的分裂增殖,活化巨噬細(xì)胞,引起內(nèi)皮進(jìn)一步損傷,因此有效降低過高的ET1含量可以減輕HLP狀態(tài)對機(jī)體的損傷[6]。NO是血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的舒血管活性物質(zhì),除能舒張血管,抑制血管平滑肌增殖外,還有抗氧化損傷、抗血小板聚集和抑制單核巨噬細(xì)胞浸潤等作用[7]。內(nèi)源性NO生成減少導(dǎo)致內(nèi)皮依賴性血管舒張功能受損是HLP引起的血管病變和AS的早期特征[8]。內(nèi)皮功能障礙在適當(dāng)?shù)闹委熛率强赡娴模琋O是一種理想的抗AS因子,提高NO濃度可改善血管內(nèi)皮功能[9]。
   
  正常狀態(tài)下,內(nèi)皮細(xì)胞合成釋放的ET和NO處于動態(tài)平衡中。HLP特別是高LDLC血癥對內(nèi)皮細(xì)胞有毒性作用[10],可使動脈內(nèi)皮細(xì)胞受損,NO的生成和釋放受到抑制;同時LDLC被氧化成氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein, OxLDL),OxLDL是造成內(nèi)皮系統(tǒng)損害的主要物質(zhì)[11],可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)前ET原的mRNA,促進(jìn)ET的合成和釋放,導(dǎo)致NO和ET平衡被破壞。
   
  本研究結(jié)果表明電針豐隆和普伐他汀均可顯著降低TC、TG、LDLC水平,同時可顯著升高NO水平(P<0.01),并在一定程度上降低ET水平。電針豐隆和西藥治療在良性調(diào)節(jié)血脂的同時,均可以在一定范圍內(nèi)糾正高脂狀態(tài)下NO和ET的失衡,從而改善高脂狀態(tài)下血管舒縮功能的障礙。因此,我們在臨床治療HLP的同時,應(yīng)兼顧血管活性物質(zhì)的使用。
   
  “血脂”與古文中的“膏脂”相類似,屬津液之范疇,并可與津液其他成分相互轉(zhuǎn)化。一旦膏脂在體內(nèi)的轉(zhuǎn)輸、排泄發(fā)生異常,則成為病理性的脂濁痰濕。脂濁注入血脈,積蓄停留,即可引發(fā)“HLP”。其發(fā)病的根本在于脾“運”和“化”的功能不足。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為豐隆穴是足陽明胃經(jīng)之絡(luò)穴,為祛痰要穴,具有調(diào)理脾胃之功效。電針豐隆穴可通過和胃健脾、化痰利濕、促進(jìn)水谷精微的運化而達(dá)到調(diào)節(jié)血脂的作用。

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作者:周利, 張紅星, 劉靈光, 萬文俊

作者單位:基金項目: 武漢市衛(wèi)生科研基金資助項目[No. 武衛(wèi)(2005)294] 武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院針灸科, 湖北 武漢 430022