P16、 cyclinD1 和CDK4 在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床

【摘要】目的 探討細(xì)胞周期調(diào)控系統(tǒng)相關(guān)因子在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化染色方法檢測P16、 cyclinD1 和CDK4在92例膀胱癌中的表達(dá)，運(yùn)用χ2檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 ① 在膀胱癌組織中P16表達(dá)下調(diào); cyclinD1和CDK4表達(dá)上調(diào)。②92例膀胱癌中，P16保留表達(dá)率隨分級、分期的增加而下降，在復(fù)發(fā)腫瘤中下降;③92例膀胱癌中，cyclinD1 和CDK4保留表達(dá)率隨分級、分期的增加而增加，在復(fù)發(fā)腫瘤中增加。結(jié)論 P16、 cyclinD1 和CDK4的表達(dá)和膀胱移行細(xì)胞癌的生物學(xué)行為密切相關(guān)，在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展中有重要意義。
【關(guān)鍵詞】 膀胱移行細(xì)胞癌 細(xì)胞周期蛋白 細(xì)胞周期蛋白依賴激酶 細(xì)胞周期蛋白依賴激酶抑制因子
The role of ex[x]pression of P16，cyclinD1 and CDK4 in transient cell cancer of bladder LI Qingyuan LIU Shaoqing CHI Yuyou Department of Urological ,Affiliated Hospital of Binzhou Medical University,Binzhou 256603

【Abstract】 ob[x]jective To probe into the relation between the ex[x]pressions of P16，cyclinD1 and CDK4 in the transient cell cancer of bladder and biological behavior of the bladder cancer.methods All of specimen of 92 cases of transient cell cancer of bladder and 13 cases normal tissue were formalized, capsulated with paraffin , sliced up with interval of 4 μm, analysised with method of HE and immunohistochemistry，examined with χ2. Results ①ex[x]pression of P16 decreases in bladder cancer . ex[x]pression of cyclinD1 and CDK4 increases in bladder cancer .②In the 92 case of bladder cancer, ex[x]pression of P16 decreases with grade and stage of tumor,ex[x]pression of P16 decreases in recurring cases.③In the 92 case of bladder cancer, ex[x]pression of cyclinD1 and CDK4 increases with grade and stage of tumor, ex[x]pression of cyclinD1 and CDK4 increases in recurring cases.Conclusion The rate of reserve ex[x]pression of P16，cyclinD1 and CDK4 in the transient cell cancer of bladder is related with biological behavior of the bladder cancer.

【Key words 】 transient cell cancer of bladder，P16，cyclinD1，CDK4

為進(jìn)一步探討其在膀胱移行細(xì)胞癌中表達(dá)的改變，本文采用免疫組化的方法系統(tǒng)的研究了P16 、cyclinD1 和CDK4 在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 臨床資料 選擇本院2000年—2006年手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的膀胱移行細(xì)胞癌石蠟標(biāo)本92例。男62例，女30例;年齡37～78歲，平均53歲。初發(fā)53例，復(fù)發(fā)39例;腫瘤直徑≥2cm者63例，<2 cm者29例;單發(fā)43例，多發(fā)49例。病理分級按WHO標(biāo)準(zhǔn)，I級22例，II級43例，III級27例。臨床分期按UICCTNM標(biāo)準(zhǔn)，Ta 10例，T1 13例，T2 32例，T3 22 例，T4 15例。13例對照標(biāo)本取至前列腺增生癥患者開放手術(shù)標(biāo)本。
1.2 方法 所有的標(biāo)本都經(jīng)過10%福爾馬林液固定、石蠟包埋、4 μm連續(xù)切片，分別進(jìn)行HE染色，P16 、cyclinD1 和CDK4單克隆抗體的免疫組化染色。按說明書操作。
1.3 結(jié)果判斷 P16和CDK4主要分布于膀胱移行上皮和腫瘤細(xì)胞的胞漿中，部分位于胞核;cyclinD1則主要分布于胞核，少數(shù)位于胞漿。細(xì)胞核染成棕黃色或棕褐色，胞漿染成淺黃色或棕黃色為陽性細(xì)胞。每張染色切片先用低倍鏡(10×10)選擇10個(gè)有代表性的視野，再換用高倍鏡(10×40)計(jì)數(shù)每一視野中陽性細(xì)胞數(shù)占所有細(xì)胞數(shù)的比例，<10%為缺失表達(dá)，>10%為保留表達(dá)。標(biāo)本皆由兩名醫(yī)師分別獨(dú)立完成，符合率為97.8%。
1.4 統(tǒng)計(jì)方法 統(tǒng)計(jì)其保留表達(dá)例數(shù)和缺失表達(dá)例數(shù)，采用SPSS11.0軟件包進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。
2 結(jié)果

13例正常膀胱黏膜和92例膀胱腫瘤組織P16、cyclinD1 和CDK4表達(dá)見表1。
3 討論

細(xì)胞周期的紊亂及調(diào)控異常是細(xì)胞異常增殖和表1 P16，cyclinD1 和CDK4的表達(dá)和膀胱移行注：與正常膀胱黏膜相比，● χ2=5.815,P<0.025，○χ2=4.286,P<0.05，◎ χ2=8.643 ,P<0.005;不同分級相比，▲ χ2=16.560 P<0.005，△ χ2=20.550，P<0.005，▽ χ2=22.469，P<0.005;與Ta～T1相比， ◆ χ2=7.848,P<0.01， ◇ χ2=7.068,P<0.01，# χ2=7.670,P<0.05;與初發(fā)相比，■ χ2=7.623,P<0.01 ，□ χ2=4.843,P<0.05，* χ2=8.919,P<0.005。
腫瘤發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)。細(xì)胞周期系統(tǒng)調(diào)控細(xì)胞周期進(jìn)程的機(jī)制涉及細(xì)胞周期蛋白、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶家族CDKs以及CDKs抑制蛋白CKIs的活性表達(dá)和調(diào)控[1]。其中，Cyclin D1控制細(xì)胞增殖周期G1S期的轉(zhuǎn)換，正常組織中表達(dá)較低或不表達(dá)，增殖較快的組織和腫瘤組織中表達(dá)較多或過表達(dá)，對腫瘤的形成有直接作用[2]。CDK4為細(xì)胞周期素依賴性蛋白激酶，對細(xì)胞周期調(diào)控點(diǎn)的調(diào)控中起重要作用，已有的研究證實(shí)，CDK4在某些腫瘤和細(xì)胞系中有明顯的異常表達(dá)[3]。P16為CDK抑制因子，與cyclins D1CDK4復(fù)合體結(jié)合，參與誘導(dǎo)G1期細(xì)胞阻滯[4]。P16 和cyclinD1 競爭性結(jié)合CDK4，共同完成細(xì)胞周期的調(diào)節(jié),P16 、cyclinD1 和CDK4在膀胱癌中表達(dá)的改變，有助于進(jìn)一步了解膀胱腫瘤的分子生物學(xué)行為，能夠?qū)Π螂装┑呐R床診斷治療及預(yù)后提供參考[5]。
本研究通過對13例正常膀胱黏膜組織和92例膀胱移行細(xì)胞癌的P16 、cyclinD1 和CDK4的免疫組化結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，在正常膀胱黏膜組織中，cyclinD1 和CDK4微量表達(dá)( 15.4 %、7.7 %)，而P16蛋白呈現(xiàn)高水平表達(dá)( 92.3%)。而在膀胱移行細(xì)胞癌組織中，P16的表達(dá)水平均普遍降低，并且和膀胱癌的分級分期呈明顯負(fù)相關(guān)，P<0.05 ，復(fù)發(fā)腫瘤表達(dá)較低，P<0.05。cyclinD1 和CDK4的表達(dá)水平均普遍升高，并且和膀胱癌的分級分期呈明顯正相關(guān)，P<0.05 ，復(fù)發(fā)腫瘤表達(dá)較高，P<0.05。
cyclinD1 和CDK4的過度表達(dá)和P16蛋白的表達(dá)下降可能引起細(xì)胞異常增殖和分化失控，終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，其表達(dá)水平的變化，可能作為膀胱癌生物學(xué)行為的指標(biāo)，為臨床治療和預(yù)后提供參考依據(jù)[7]。由于P16 、cyclinD1 和CDK4在G1檢查點(diǎn)處起著重要作用，通過抑制cyclinD1 和CDK4的過度表達(dá)和促進(jìn)P16蛋白的表達(dá)可使細(xì)胞增殖阻滯于G1期，有助于抑制細(xì)胞周期的增殖和分化，達(dá)到抑制腫瘤增生的作用[8]。因此，研究P16 、cyclinD1 和CDK4表達(dá)具有重要意義。
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