腎透明細(xì)胞癌中FGFR1的表達(dá)及其臨床意義

作者：郭峻莉1,羅志飛2,鄭少江2　　作者單位：國(guó)家自然科學(xué)基金(30660055，81060184);教育部新世紀(jì)人才基金(NCET080657) (海南醫(yī)學(xué)院 1.海南省熱帶病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;2.病理學(xué)教研室, 海南 海口 571101)

　　【摘要】目的：探討堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1 (fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1)在腎透明細(xì)胞癌(renal clear cell carcinoma， RCCC)中的表達(dá)及其臨床意義。方法：采用SP免疫組化方法檢測(cè)45例RCCC組織中FGFR1的表達(dá)。同時(shí)，用原位雜交方法檢測(cè)20例RCCC組織中FGFR1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果：在RCCC中FGFR1蛋白及FGFR1 mRNA表達(dá)的陽(yáng)性率分別為68.9%(31/45)、80.0%(16/20), 明顯高于癌旁正常腎組織(P<0.01)。FGFR1蛋白表達(dá)與FGFR1 mRNA的表達(dá)呈一致性(P<0.05)。FGFR1蛋白表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)和臨床TNM分期相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論：FGFR1與腎透明細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，對(duì)判斷預(yù)后具有一定臨床意義。

　　【關(guān)鍵詞】 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1,腎透明細(xì)胞癌,免疫組織化學(xué);原位雜交

　　[ABSTRACT] ob[x]jective: To investigate the ex[x]pression and their clinical relationship of fibroblast growth factor receptor 1(FGFR1) in renal clear cell carcinoma(RCCC). Methods：SP immunohistochemical method was used to examine the ex[x]pression of FGFR1 protein in 45 cases of RCCC，which had not been treated by chemotherapy and radiotherapy before surgery. And then in situ hybridization was performed to detect the mRNA level of FGFR1 gene in 20 freezing specimens. Results：Out of 45 RCCC，the positive rates of FGFR1 protein and FGFR1 mRNA were 68.9%(31/45), 80.0%(16/20), respectively. It was found that the ex[x]pression of FGFR1 was obviously higher in RCCC than in normal tissue adjacent to the tumor(P<0.01). The ex[x]pression of FGFR1 protein was coincidence with the FGFR1 mRNA, and was significantly correlated with the histologic grade as well as the TNM stage of tumor(P<0.05). Conclusions：The ex[x]pression of FGFR1 is closely involved in the development, growth and me[x]tastasis of RCCC and is comprehensive indexes for prognosis.

　　[KEY WORDS] Fibroblast growth factor receptor1; Renal clear cell carcinoma; Immuohistochemistry;In situ hybridization

　　現(xiàn)已證實(shí)實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移是依賴于血管生成的。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體1(fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1)是重要的腫瘤血管生成調(diào)節(jié)因子之一，其生物活性主要是通過與高親和性配體——bFGF結(jié)合而發(fā)揮作用[1]。我們本課題組和國(guó)外研究已表明FGFR1在腫瘤血管生成中扮演著重要角色[24]。同時(shí)，研究還表明，bFGF與腎癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。因此，本研究采用免疫組化和原位雜交技術(shù)觀察FGFR1在腎透明細(xì)胞癌(renal clear cell carcinoma，RCCC)組織中的表達(dá)及其臨床意義。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　收集我院病理科2000年1月～2009年12月手術(shù)切除腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本45例，男性28例，女性17例;年齡在29～75歲之間。所有標(biāo)本術(shù)前均未行放化療, 術(shù)后病理確診為腎透明細(xì)胞癌;另取10例癌旁正常腎組織作對(duì)照。按2002年美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)(AJCC)腎癌臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[5], 1期21例, 2期12例,3期11例,4期1例。其中20例為腎癌患者手術(shù)切除標(biāo)本，術(shù)后立即投入液氮保存?zhèn)浜罄m(xù)原位雜交用。FGFR1兔抗鼠多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司, SP試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司提供，原位雜交試劑盒購(gòu)置武漢博士德生物工程有限公司。

　　1.2 實(shí)驗(yàn)方法

　　分別采用免疫組化和原位雜交法檢測(cè)FGFR1蛋白和mRNA的表達(dá)，免疫組化及原位雜交染色具體操作方法參照文獻(xiàn)[46]并嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行。用己知陽(yáng)性片作陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液分別代替一抗作陰性對(duì)照。

　　1.3 陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

　　FGFR1陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的百分比進(jìn)行分級(jí)[4]。將染色強(qiáng)度分為：無(wú)著色為0分，淺黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。將陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的百分比分為：<10%為0分，10%～50%為1分，51%～75%為2分，>75%為3分。兩項(xiàng)相加后分陰性()和陽(yáng)性(+)：0～1分為(-)，2分以上為(+)。

　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　　采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2及Fisher‘s精確概率法檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

　　2 結(jié)果

　　2.1 FGFR1蛋白在RCCC中的表達(dá)

　　45例腎透明細(xì)胞癌中有31例FGFR1蛋白呈陽(yáng)性表達(dá)(圖1)，陽(yáng)性率為68.9%(31/45)，癌旁正常腎組織中只有1例FGFR1蛋白弱表達(dá), 兩組之間存在極顯著性差異 (P<0.01)。FGFR1蛋白的表達(dá)與病理組織學(xué)分級(jí)和臨床TNM分期均呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡無(wú)相關(guān)(P>0.05)。

　　2.2 FGFR1mRNA在RCCC中的表達(dá)

　　FGFR1 mRNA陽(yáng)性表達(dá)部位在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)(圖2)。20例腎透明細(xì)胞癌冰凍切片中FGFR1 mRNA的陽(yáng)性率為80.0%(16/20)。同時(shí)此20例標(biāo)本的免疫組化染色結(jié)果顯示FGFR1的蛋白與mRNA均表達(dá)陽(yáng)性的有15例，組間比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明FGFR1的蛋白表達(dá)與mRNA的表達(dá)趨勢(shì)是一致的。

　　3 討論

　　腎透明細(xì)胞癌是泌尿系常見惡性腫瘤，約占腎細(xì)胞癌(RCC) 的70%～80% ,腫瘤血管形成豐富為其特點(diǎn), 其發(fā)生發(fā)展依賴于血管生成。FGFR1是一種跨膜蛋白質(zhì)，屬于酪氨酸激酶受體家族中的一類，由細(xì)胞外區(qū)、跨膜區(qū)和細(xì)胞內(nèi)區(qū)組成。其作為配體結(jié)合區(qū)的胞外段和配體bFGF結(jié)合后發(fā)生二聚體化導(dǎo)致自身磷酸化，從而誘導(dǎo)腫瘤血管生成，有利于腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移[1]。有文獻(xiàn)報(bào)道bFGF與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。我們前期的研究也表明FGFR1在腫瘤血管生成中發(fā)揮著重要作用，阻斷FGFR1/bFGF之間的信號(hào)通路可以抑制腫瘤血管生成進(jìn)而達(dá)到治療腫瘤的目的[24]。

　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著病理組織學(xué)分級(jí)和臨床TMN分期的增高，F(xiàn)GFR1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)率明顯升高呈正相關(guān)，表明腎透明細(xì)胞癌的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移依賴于血管生成，同時(shí)提示FGFR1的表達(dá)在腎透明細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用，可能是判斷腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的一個(gè)重要參數(shù)。由于bFGF是腎細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中重要血管形成誘導(dǎo)因子之一，而FGFR1依賴結(jié)合配體bFGF在腫瘤血管生成中發(fā)揮其生物活性，由此可見bFGF/FGFR1信號(hào)通路在促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌血管生成中扮演著重要的角色，但具體機(jī)制尚待深入研究。為了增加實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性，本實(shí)驗(yàn)還采用原位雜交和免疫組化兩種方法從基因和蛋白水平上分別檢測(cè)FGFR1在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示兩種檢測(cè)方法符合率是75.0%，表明檢測(cè)結(jié)果呈一致性。腫瘤血管生成是一個(gè)多步驟多因素調(diào)控的復(fù)雜過程，本研究結(jié)果將為后繼以FGFR1為靶點(diǎn)的抗腫瘤血管生成生物治療提供詳實(shí)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

　　郭峻莉等.腎透明細(xì)胞癌中FGFR1的表達(dá)及其臨床意義