兔單克隆抗體在橫紋肌溶解相關(guān)急性腎損傷中的潛在應(yīng)用

肌紅蛋白（Mb）是一種微小的單體蛋白，其重量?jī)H為17.8kDa，主要在脊椎動(dòng)物的心臟和骨骼肌中表達(dá)。它具有結(jié)合、儲(chǔ)存和運(yùn)輸氧到線粒體的關(guān)鍵作用。之前的研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在心肌中，每克組織濕重中的Mb含量大約為2.5mg，而在骨骼肌中這個(gè)數(shù)值約為4.0mg。

Mb由珠蛋白（α-珠蛋白鏈和β-珠蛋白鏈）和血紅素基團(tuán)共同組成，它通常存在于脊椎動(dòng)物的橫紋肌和心肌中。然而，如果大量的Mb出現(xiàn)在血液、尿液或腎臟等器官中，這將是非常危險(xiǎn)的，因?yàn)樗赡芤l(fā)一種可能危及生命的綜合征——橫紋肌溶解癥（RM）綜合征。橫紋肌溶解癥（RM）是骨骼肌受損和細(xì)胞內(nèi)分解產(chǎn)物（主要包括Mb）釋放到血液循環(huán)中。 橫紋肌溶解的誘因多種多樣，包括擠壓傷、創(chuàng)傷、某些感染、藥物、酒精和毒素。在這些因素中，Mb起著關(guān)鍵的作用，是橫紋肌溶解病理生理學(xué)的重要組成部分。Mb是骨骼肌的主要成分，但當(dāng)它釋放到血液中時(shí)，可能會(huì)引發(fā)急性腎損傷（AKI），這是嚴(yán)重橫紋肌溶解的危險(xiǎn)并發(fā)癥。

目前的研究已經(jīng)明確，Mb通過(guò)三種機(jī)制引起急性腎損傷（AKI）：第一種機(jī)制是腎小管堵塞，這是由Mb的毒性所導(dǎo)致的；其次，氧化損傷是由Mb中的鐵解離和自由基的釋放引起的；一種機(jī)制是由于Mb引起的脂質(zhì)過(guò)氧化。

在診斷和基礎(chǔ)研究中，抗體發(fā)揮著重要的作用。對(duì)于心肌梗死或橫紋肌溶解的檢測(cè)，Mb的實(shí)驗(yàn)室檢查是為重要在的患一者項(xiàng)發(fā)生指標(biāo)。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基礎(chǔ)研究中，RM-AKI或擠壓綜合征-AKI（CS-AKI）仍然是是腎損傷的關(guān)鍵生物標(biāo)志物。

Mb的抗體檢測(cè)取決于抗體的特異性和親和力，單克隆抗體正是針對(duì)具有高純度和強(qiáng)特異性優(yōu)勢(shì)的特定表位進(jìn)行研發(fā)的。它已被廣泛應(yīng)用于各種生物醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域，并促進(jìn)了許多學(xué)科的發(fā)展。特別是重組兔單克隆抗體，它具有諸多優(yōu)勢(shì)，包括更好的特異性和靈敏度、高批次間一致性和可重復(fù)性、無(wú)動(dòng)物源性制劑、長(zhǎng)期供應(yīng)安全，以及由于更大的兔免疫庫(kù)，對(duì)不同靶標(biāo)具有更廣泛的免疫反應(yīng)性。目前已經(jīng)有針對(duì)人Mb的重組兔單克隆抗體成功制備并商業(yè)化，用于實(shí)驗(yàn)然室研究。不幸的是，迄今為止，尚未報(bào)道用于大鼠Mb免疫原的重組兔抗Mb單克隆抗體具有高親和力、廣泛的物種反應(yīng)性和多方面的應(yīng)用。

為此，研究人員通過(guò)外源性大鼠Mb基因真核表達(dá)、動(dòng)物免疫、雜交瘤篩選、重鏈和輕鏈基因測(cè)序及瞬時(shí)轉(zhuǎn)染質(zhì)量比優(yōu)化、重組抗體表達(dá)純化等技術(shù)制備的新型重組兔抗大鼠Mb單克隆抗體。具有極高親和力（KD= 1.21 pM），廣泛的物種反應(yīng)性（小鼠，大鼠，人和馬）和良好的組織特異性（骨骼肌和心?。?。應(yīng)用重組兔抗Mb單克隆抗體通過(guò)蛋白質(zhì)印跡（WB），免疫組織化學(xué)和免疫熒光診斷RM-AKI疾病的腎臟，心肌，骨骼肌組織和血液中的Mb沉積。這項(xiàng)研究揭示了新型單克隆抗體在RM相關(guān)疾病的潛在應(yīng)用。

雜交瘤技術(shù)是抗體發(fā)現(xiàn)主要途徑之一，在科研抗體開(kāi)發(fā)和抗體藥物發(fā)現(xiàn)中都扮演著重要角色。雜交瘤細(xì)胞既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體，可用來(lái)制備高純度、污染少、可重復(fù)的單克隆抗體。雜交瘤抗體發(fā)現(xiàn)將幫助科研人員加快研究進(jìn)度，通過(guò)多種抗原免疫方式，經(jīng)融合、篩選、檢測(cè)，得到高質(zhì)量的雜交瘤細(xì)胞助力基礎(chǔ)科學(xué)研究。

雜交瘤技術(shù)優(yōu)勢(shì)：多肽、重組蛋白（五大表達(dá)系統(tǒng)）、小分子和 DNA 免疫等多種方案；從基因序列到雜交瘤細(xì)胞開(kāi)發(fā)及鑒定的整體解決方案；單抗項(xiàng)目 2000+，成功率高達(dá) 95.4%；包括IHC/IF/FC 等應(yīng)用級(jí)別抗體開(kāi)；WB/IHC/IF/FC 等多種檢測(cè)方式；雜交瘤細(xì)胞測(cè)序，抗體人源化，重組抗體表達(dá)，化學(xué)發(fā)光應(yīng)用抗體對(duì)篩選及大規(guī)模抗體生產(chǎn)等）