發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)分泌新機(jī)制，血清中的PKCδ有望用于肝癌早期診斷

在日本，肝癌是一種每年約有3.8萬人罹患， 其中2.5萬人死亡的疾病，病癥難以顯現(xiàn)，且隨著病情的進(jìn)展愈后也不佳。已知會經(jīng)過慢性肝炎、非酒精性脂肪肝、肝硬化等階段而發(fā)病，但與其他癌癥一樣，致癌機(jī)制尚不清楚。

在此之前，研究團(tuán)隊已發(fā)現(xiàn)，在正常細(xì)胞中核轉(zhuǎn)運(yùn)因子importin1和PKCδ等蛋白質(zhì)停留于細(xì)胞內(nèi)，而在肝癌細(xì)胞中則特異性地分泌到了細(xì)胞外，同時還明確了這些蛋白質(zhì)具有細(xì)胞增殖能力等事實(shí)。

此次研究團(tuán)隊以弄清楚該分泌機(jī)制為目的，著眼于PKCδ進(jìn)行了全面的蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

分析結(jié)果顯示，PKCδ通過與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白E-Syt1的相互作用而停留于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。由于E-Syt1的表達(dá)抑制，停留出現(xiàn)減少，在不分泌importin1和PKCδ等物質(zhì)的胃癌細(xì)胞中則不存在這樣的停留。另外，PKCδ通過與E-Syt1的相互作用，被與自噬相關(guān)的囊泡（SEC22B）所吸收，并通過與細(xì)胞膜的SNARE蛋白質(zhì)的相互作用被釋放到細(xì)胞膜外部。

研究團(tuán)隊進(jìn)一步將PKCδ抗體試劑遞送到細(xì)胞內(nèi)，調(diào)查了其對腫瘤形成能力的影響，發(fā)現(xiàn)該抗體抑制了腫瘤形成。表明了其具有作為新治療靶標(biāo)的可能性。

接下來，基于這些基礎(chǔ)研究，以肝細(xì)胞癌患者血清中的PKCδ為對象，研究了其作為肝癌早期診斷的血液生物標(biāo)志物使用的可能性。

首先，用夾心ELISA法檢測了9例健康人和313例慢性肝?。ò?82例各種階段的肝癌）臨床患者的血清，驗(yàn)證了其診斷能力，同時與現(xiàn)有的2種肝細(xì)胞癌標(biāo)志物（AFP、PIVKA2）進(jìn)行了比較。

結(jié)果顯示，肝細(xì)胞癌組的血清PKCδ明顯高于健康人和慢性肝病患者組。由此可知，血清PKCδ可以作為新的生物標(biāo)志物來區(qū)分肝癌患者（以健康人為對照組）。另外，慢性肝病的血清PKCδ的肝細(xì)胞癌診斷能力與現(xiàn)有的標(biāo)志物基本相同。

由于血清PKCδ和現(xiàn)有的各標(biāo)志物沒有關(guān)聯(lián)性，因此組合使用這兩種標(biāo)記物可以提高診斷性能。現(xiàn)有2種標(biāo)志物為陰性病例中的約半數(shù)可以通過血清PKCδ檢測出陽性來。

此外，血清PKCδ與其他2種現(xiàn)有標(biāo)志物不同，20毫米以下的超早期肝癌的陽性率約為45%，高于現(xiàn)有標(biāo)志物（各約為15%），展現(xiàn)出了可用于以往難以實(shí)現(xiàn)的早期診斷的可能性。

研究團(tuán)隊今后將在推進(jìn)診斷試劑盒開發(fā)的同時，對血清PKCδ與患者的臨床醫(yī)學(xué)特征的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行解析，并以多設(shè)施共同研究的形式開展實(shí)用性驗(yàn)證。