子癇前期患者胎盤組織中PDGFA的表達(dá)及意義

作者：高學(xué)印,薛瑞敏,鄭秀玲,郭影,吉增良　　作者單位：055250 河北省巨鹿縣醫(yī)院婦產(chǎn)科(高學(xué)印、薛瑞敏、鄭秀玲、吉增良);河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科(郭影)

　　【摘要】目的 通過觀察子癇前期患者胎盤組織血小板源性生長因子A(PDGFA)的表達(dá)，探討子癇前期發(fā)病機(jī)制。方法 采用HE染色觀察胎盤形態(tài)學(xué)病理變化，免疫組化法測(cè)定39例子癇前期患者及20例正常晚孕婦女胎盤組織中PDGFA的表達(dá)強(qiáng)度。結(jié)果 (1)HE染色顯示正常孕足月胎盤絨毛和輕度子癇前期胎盤絨毛中滋養(yǎng)細(xì)胞以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主，而重度子癇前期胎盤絨毛中細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生，絨毛大部分不成熟，胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀，蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化，蛻膜纖維素性壞死也明顯增多。(2)重度子癇前期組PDGFA表達(dá)強(qiáng)度較正常妊娠組、輕度子癇前期組明顯升高(P<0.05)，而PDGFA表達(dá)強(qiáng)度在正常妊娠組、輕度子癇前期組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 重度子癇前期患者胎盤形態(tài)學(xué)病理變化明顯，且與病情嚴(yán)重程度呈平行關(guān)系。PDGFA由胎盤產(chǎn)生，并參與了妊娠期高血壓疾病的病理生理過程。
　　【關(guān)鍵詞】 妊娠期高血壓疾病;血小板源性生長因子A;胎盤組織

　　ex[x]pression and significance of PDGFA in placenta from patients with pre-eclampsia GAO Xueyin,XUE Ruimin,ZHENG Xiuling, et al. Department of Gynecology and Obstetrics, Julu Cuntry Hospital, Hebei,Julu 055250,China

　　【Abstract】 ob[x]jective To observe the changes of plateletderived growth factor (PDGFA) in patients with preeclampsia to explore its pathogenesis.Methods The ex[x]pression levels of PDGFA in placenta of 39 patients with preeclampsia and 20 normal late pregnant women were detected by immunohistochemstry and HE staining.Results (1)The placental villus in control group and mild preeclampsia group were characterized by dominant syneytiotrophoblast cells,however, the placental villlus in severe preeclampsia group were characterized by cytotrophoblastic cells proliferating,ba[x]sement membrane thickening,syncytiotrophoblast knotting in creasing, synchtiotrophoblast budding .(2)The positive ex[x]pression rates of PDGFA in control group, mild preeclampsia group and severe preeclampsia group were 38.89%, 44.97% and 76.54% respectively. There was a significant difference between mild and severe preeclampsia group(P< 0.05), but there was no difference between control group and mild preeclampsia group(P>0.05).Conclusion The pathological changes of placenta are paralleled with the severity of preeclampsia，which indicates that the placental pathological changes play an important role in the development of severe preeclampsia. The ex[x]pression of PDGFA may be involved in the pathophysiological process of hypertension in gestational period.

　　【Key words】 hypertension in gestational period;plateletderived growth factorA; placenta

　　妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP)是妊娠期一種嚴(yán)重的并發(fā)癥，國內(nèi)發(fā)病率約為7%～12%[1]。HDCP是圍產(chǎn)期母嬰死亡的重要原因之一。有研究認(rèn)為：子宮螺旋動(dòng)脈的重鑄不良導(dǎo)致胎盤缺血，釋放某些因子入血引起母體廣泛的內(nèi)皮細(xì)胞損傷和功能紊亂是HDCP發(fā)病的、中心環(huán)節(jié)[2]。血小板源性生長因子A(plateletderived growth factor，PDGFA)是一種結(jié)締組織源性細(xì)胞的重要促有絲分裂劑，具有強(qiáng)烈的血管收縮作用，能進(jìn)一步誘導(dǎo)血小板聚集、激活，繼而巨噬細(xì)胞移行并活化，導(dǎo)致妊娠患者的胎盤蛻膜螺旋動(dòng)脈發(fā)生急性粥樣硬化。HDCP患者體內(nèi)釋放過多的白介素6 (B cell differentiation factor6，IL6)，刺激PDGFA產(chǎn)生，使動(dòng)脈壁對(duì)低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)反應(yīng)性增高及血管收縮，從而引起血管損傷及血壓升高。LDL對(duì)增殖活躍期的血管內(nèi)皮細(xì)胞毒性作用很強(qiáng)，促進(jìn)其老化，導(dǎo)致細(xì)胞功能失調(diào)[3]。本研究通過HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征并檢測(cè)正常晚孕女性與妊娠期高血壓疾病患者胎盤PDGFA的變化，旨在探討PDGFA與妊娠期高血壓疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　1 資料與方法
　　1.1 一般資料 選擇2006年3月至2007年10月在河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科剖宮產(chǎn)分娩的產(chǎn)婦59例，其中正常妊娠組20例，年齡22～30歲，平均年齡26歲;孕周36～41周，平均38周;為同期住院的無妊娠合并癥及并發(fā)癥的正常孕婦，均因胎位、產(chǎn)道異?；蛏鐣?huì)因素等行剖宮產(chǎn)分娩。輕度子癇前期組21例年齡22～33歲，平均年齡28歲;孕周35～41周，平均37周;重度子癇前期組18例，年齡22～35歲，平均年齡29歲;孕周37～40周，平均37周;無產(chǎn)科其它并發(fā)癥及妊娠合并癥，無高血壓及妊娠期高血壓疾病家族史。按參考文獻(xiàn)[4]診斷及分類。3組孕婦年齡、孕周差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　1.2 方法

　　1.2.1 試劑：兔抗 PDHFA多克隆抗體、DAB顯色劑等均購自北京奧博森生物技術(shù)有限公司。
　　1.2.2 胎盤標(biāo)本采集與制備：3組孕婦在剖宮產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出后，從胎盤母體面中央(避開明顯纖維化、鈣化區(qū))切取胎盤組織1.0 cm×1.0 cm×1.0 cm，充分漂洗，置10%甲醛溶液中固定24 h以上，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚度2 μm，HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征，再進(jìn)行免疫組化染色。PDGFA工作濃度均為1∶400。
　　1.2.3 免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞胞漿有棕褐色顆粒沉著為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)每個(gè)視野所含細(xì)胞數(shù)，計(jì)數(shù)其中陽性細(xì)胞數(shù)及著色強(qiáng)度。根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及著色強(qiáng)度綜合制定免疫組化半定量記分標(biāo)準(zhǔn)：①陽性細(xì)胞記分：無陽性細(xì)胞為0分;<25%為1分;25%～50%為2分;>50%為3分。②著色強(qiáng)度記分：細(xì)胞內(nèi)無染色或染色與背景一致為0分;細(xì)胞漿內(nèi)可見少量淡黃色顆粒，明顯高于背景為1分;細(xì)胞漿內(nèi)可見較多深棕色顆粒為2分;細(xì)胞漿內(nèi)可見大量深棕色或褐色顆粒為3分。兩個(gè)分值相加為終判定結(jié)果：0～2分(-)，3～4分(+)，5～6分(++)。
　　1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，采用單因素方差分析，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2 結(jié)果

　　2.1 HE染色觀察胎盤組織學(xué)特征 正常孕足月胎盤絨毛和輕度子癇前期胎盤絨毛中滋養(yǎng)細(xì)胞以合體滋養(yǎng)細(xì)胞為主，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞比較少見，胎盤蛻膜纖維化不明顯(圖1、2)，而重度子癇前期胎盤絨毛中，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生，滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚，絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積，合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多，合體細(xì)胞出芽，發(fā)生纖維素樣壞死的絨毛增多，絨毛血管增多， 絨毛大部分不成熟，胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀，蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化，蛻膜纖維素性壞死也明顯增多(圖3)。
　　2.2 胎盤組織中PDGFA的定位及表達(dá) PDGFA表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿，陽性細(xì)胞著色呈棕色、褐色，主要分布于胎盤細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞，在蛻膜間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞也有少量表達(dá)。正常妊娠組PDGFA表達(dá)為弱陽性(圖4、5);輕度子癇前期組PDGFA表達(dá)為陽性(圖6、7);重度子癇前期組PDGFA表達(dá)為強(qiáng)陽性(圖8、9)。正常妊娠組PDGFA表達(dá)水平低于輕度子癇前期組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);輕度子癇前期組和重度子癇前期組中PDGFA表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。本研究發(fā)現(xiàn)，HDCP患者胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀，蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化，且在該處組織中PDGFA呈陽性表達(dá)。表1 3組PDGF-A不同程度陽性表達(dá)情況比較
　　3 討論

　　HDCP是妊娠期特有的疾病，妊娠終止后多數(shù)病理變化可以逆轉(zhuǎn)，說明胎盤這一器官可能在HDCP發(fā)病中起到重要的作用。近年來研究表明， 重度子癇前期患者在胎盤形成過程中存在著螺旋小動(dòng)脈血管重鑄異常的現(xiàn)象，其滋養(yǎng)細(xì)胞侵蝕能力下降，侵蝕范圍縮小，浸潤僅達(dá)蛻膜段，子宮螺旋動(dòng)脈未經(jīng)歷正常妊娠時(shí)的變化卻保持著相對(duì)狹窄的管徑和對(duì)縮血管物質(zhì)的反應(yīng)，從而造成胎盤缺血[5]。本研究顯示：重度子癇前期胎盤絨毛中，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生，滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚，絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積，合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多，合體細(xì)胞出芽，發(fā)生纖維素樣壞死的絨毛增多，絨毛血管增多，絨毛大部分不成熟，胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀，蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化，蛻膜纖維素性壞死也明顯增多。與胎盤缺血血氧所致的一系列病理變化相一致。
　　研究表明，胎盤的胎兒面血管內(nèi)皮層及滋養(yǎng)層均有PDGF及其受體表達(dá)，且在重度子癇前期患者組織的閉塞性動(dòng)脈炎處陽性細(xì)胞染色更深[6]。HDCP患者血循環(huán)中TNFα、血栓素等升高，刺激內(nèi)皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板，使之活化，血小板α 顆粒中的PDGFA釋放增多，從而使胎盤病變血管局部，產(chǎn)生PDGFA等血管活性物質(zhì)增多[7]。胎盤淺著床，局部缺血缺氧，缺氧激活原癌基因sis促進(jìn)PDGFA過量表達(dá)，致使螺旋動(dòng)脈在多種生長因子共同作用下呈現(xiàn)粥樣硬化改變[6]。本研究表明，重度子癇前期胎盤細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞、蛻膜間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)PDGFA的強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，并且隨著HDCP的病情加重，PDGFA表達(dá)增高，提示胎盤中PDGFA表達(dá)增高，可能阻礙了HDCP胎盤母體面螺旋動(dòng)脈血管重塑， 導(dǎo)致病變血管強(qiáng)烈收縮，局部缺血缺氧，細(xì)胞毒性因子釋放增多， 形成惡性循環(huán)。
　　PDGFA對(duì)蛻膜間質(zhì)細(xì)胞、成纖維細(xì)胞具有強(qiáng)大趨化作用。Kimatrai等[8]研究發(fā)現(xiàn)，蛻膜的主要成分蛻膜間質(zhì)細(xì)胞在結(jié)構(gòu)及功能上都與具有收縮活性的成纖維細(xì)胞相似，PDGFA 不但能誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞收縮也能誘導(dǎo)蛻膜間質(zhì)細(xì)胞收縮。本研究發(fā)現(xiàn)，重度子癇前期胎盤絨毛中，細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞明顯增生，滋養(yǎng)細(xì)胞下基底膜增厚，絨毛間質(zhì)纖維蛋白沉積，合體細(xì)胞結(jié)節(jié)增多，胎盤蛻膜間質(zhì)細(xì)胞呈大小不等塊狀、桿狀，蛻膜血管內(nèi)皮細(xì)胞纖維化，且在該處組織中PDGFA呈陽性表達(dá)，提示胎盤有不規(guī)則的纖維化，表明HDCP患者胎盤蛻膜PDGFA表達(dá)的增高加速了蛻膜纖維化， 促進(jìn)蛻膜間質(zhì)細(xì)胞收縮，從另一個(gè)方面加重了胎盤缺血缺氧。Mendoza等[9]研究表明，PDGF A功能的表達(dá)具有劑量依賴性，低劑量能促進(jìn)血管新生，高劑量促使毛細(xì)血管豐富的組織纖維化。胎盤是毛細(xì)血管豐富的組織，對(duì)PDGF1的表達(dá)敏感。本研究結(jié)果顯示正常晚孕組PDGFA表達(dá)水平低于輕度子癇前期組，但兩者比較無顯著差異，重度子癇前期組和輕度子癇前期組中PDGFA表達(dá)水平比較明顯升高，提示隨著PDGF A水平升高，胎盤纖維化逐漸加重。
　　綜上所述，PDGFA在HDCP的發(fā)生發(fā)展中的影響是多方面的，隨著研究的不斷深入，將對(duì)其作用機(jī)制有進(jìn)一步的了解，為臨床防治HDCP提供更多的理論依據(jù)。
　　【參考文獻(xiàn)】
　　1 李淑賢.MP妊娠高血壓綜合征監(jiān)測(cè)系統(tǒng)對(duì)妊娠期高血壓綜合征的預(yù)測(cè)價(jià)值.河北醫(yī)藥，2009，31：1138.

　　2 Robers JM，Lina KY.Recent insights into the pathogenesis of preeclampsin.Placenta，2002，23：359372.

　　3 Floege J，Eitner F，Alpers CE.A new look at plateletderived growth factor in renal disease. J Am Soc Nephrol，2008，19：1223.

　　4 樂杰主編.婦產(chǎn)科學(xué).第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004.97106.

　　5 劉棣臨.全國妊高征及其并發(fā)癥的診斷及處理學(xué)術(shù)研討會(huì)紀(jì)要.中華婦產(chǎn)科雜志，1993，28：262267.

　　6 Gurski Gurski MR，Gonzalez E，Brown EG，et al.Immunochemical localization of plateletderived growth factor in placenta and its possible role in preeclampsia.J Investig Med，1999，47：128133.

　　7 Parker SB，Dobrian AD，Wade SS，et al. AT(1) receptor inhibition does not reduce arterial wall hypertrophy or PDGFA ex[x]pression in renal hypertension.Am J Physiol Heart Circ Physiol， 2000，278：613622.

　　8 Kimatrai M，Oliver C，AbadiaMolina AC，et al.Contractile activity of human decidual stromal cells.J Clin Endocrinol me[x]tab，2003，88：844849.

　　9 Mendoza AE，Young R，Orkin SH. Increased plateletderived growth factor Achain ex[x]pression in human uterine smooth muscle cells during the physiologic hypertrophy of pregnancy. Proc Natl Acad Sci USA，1990，87：21772181.