P53蛋白與伽瑪?shù)吨委熀蟠贵w泌乳素瘤侵襲性的相關(guān)性

　　作者：劉吉祥,劉斌,任洪波　　作者單位： 河北邯鄲，邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外一科

　　【摘要】目的研究伽瑪?shù)吨委熀蟠贵w泌乳素瘤P53蛋白的表達(dá)，探討其與放療后垂體泌乳素瘤細(xì)胞侵襲性的關(guān)系。方法 將76例垂體腺瘤手術(shù)標(biāo)本分為放療組與非放療組，采用S-P法免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)P53蛋白表達(dá)，分析兩組P53蛋白表達(dá)水平的差異性。結(jié)果 放療組P53蛋白全部陽(yáng)性表達(dá)，較非放療組顯著增高(P<0.05);侵襲性垂體瘤組P53蛋白表達(dá)顯著增高。結(jié)論 伽瑪?shù)吨委熀蟠贵w泌乳素P53蛋白表達(dá)增強(qiáng)，原因可能與放射性損傷及泌乳素瘤侵襲性改變有關(guān)，P53蛋白是影響垂體泌乳素瘤侵襲性行為的調(diào)控因子。

　　【關(guān)鍵詞】 泌乳素瘤; 伽瑪?shù)吨委? P53蛋白; 侵襲性; 免疫組織化學(xué)

　　垂體泌乳素瘤是成人常見(jiàn)垂體腺瘤類型，治療主要包括藥物治療、手術(shù)治療、放射治療。伽瑪?shù)妒?0世紀(jì)末較流行的泌乳素瘤治療方式，其放射生物學(xué)效應(yīng)機(jī)制十分復(fù)雜,目前并不十分清楚，對(duì)于伽瑪?shù)吨委熋谌樗亓龅倪m應(yīng)證學(xué)術(shù)界仍然存在一些爭(zhēng)論。部分放療后患者殘留腫瘤繼續(xù)生長(zhǎng)導(dǎo)致癥狀反復(fù)，腫瘤復(fù)發(fā)，瘤組織纖維增生，與周邊正常組織分界欠清，給手術(shù)帶來(lái)一定困難。P53是目前研究得廣泛的一種腫瘤抑制基因，在垂體瘤發(fā)生、生物學(xué)行為改變、細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞凋亡等方面都有很重要的作用，并且野生型P53基因參與了放射性DNA損傷的調(diào)控修復(fù)，腫瘤細(xì)胞的放射治療敏感性與P53基因的狀態(tài)有著密切的關(guān)系。本試驗(yàn)采用免疫組化方法對(duì)P53蛋白進(jìn)行檢測(cè) ,以探討其在伽瑪?shù)吨委熀蟠贵w泌乳素瘤中的表達(dá)及與腫瘤侵襲性的關(guān)系及意義。

　　1 資料與方法

　　1.1 一般資料 收集本院神經(jīng)外科2005—2009年資料完整經(jīng)病理證實(shí)為垂體泌乳素瘤病例76例，其中男12例,女64例;平均 (25.9±12. 5) 歲;平均病程(35.2±10.4)個(gè)月。根據(jù)影像學(xué)改變、術(shù)者觀察以及病理檢查鞍底硬膜蝶竇黏膜有無(wú)侵襲判斷，76例中侵襲性垂體瘤36例，非侵襲性垂體瘤40例。伽瑪?shù)斗派渲委煵捎肕RI定位，根據(jù)腫瘤形狀選取靶點(diǎn)，中心劑量45Gy，周圍劑量18Gy，視神經(jīng)等重要組織結(jié)構(gòu)周圍小于10Gy。

　　1.2 試劑及方法

　　1.2.1 試劑 鼠抗人P53單克隆抗體、S-P免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。二甲苯、酒精、蘇木精、伊紅、PBS緩沖液，中性樹(shù)脂，染色缸，載玻片，蓋玻片，載玻片支架。

　　1.2.2 方法 于超薄切片機(jī)做4μm連續(xù)組織切片，貼片于經(jīng)過(guò)APES預(yù)處理的載玻片上，56℃烘箱過(guò)夜使其粘附緊密。切片脫蠟至水，組織切片于二甲苯中常規(guī)脫蠟30min，梯度酒精水合每濃度5min。照試劑盒說(shuō)明書操作，進(jìn)行S-P法組織免疫化學(xué)染色。

　　1.3 結(jié)果判定 P53染色結(jié)果判定：由同一實(shí)驗(yàn)者對(duì)未揭盲的切片觀察分析。切片根據(jù)細(xì)胞核有無(wú)染色分為陰性、陽(yáng)性。陽(yáng)性切片細(xì)胞核染為棕黃色，陰性切片細(xì)胞核無(wú)染色為藍(lán)色。

　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理。根據(jù)數(shù)據(jù)類型不同，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及精確概率法χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。檢驗(yàn)水平取α=0.05。

　　2 結(jié)果

　　2.1 P53表達(dá)結(jié)果 伽瑪?shù)吨委熃M和非伽瑪?shù)督M中P53蛋白表達(dá)結(jié)果伽瑪?shù)吨委熃M和非伽瑪?shù)吨委熃MP53陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行精確概率法χ2檢驗(yàn)，伽瑪?shù)督M較非伽瑪?shù)督M顯著增高，P<0.05。

　　2.2 侵襲性差異分析 非侵襲性泌乳素瘤組和侵襲性非侵襲性泌乳素瘤組和侵襲性泌乳素瘤組P53陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行精確概率法χ2檢驗(yàn)，非侵襲性泌乳素瘤組較侵襲性泌乳素瘤組顯著增高，P<0.05。

　　3 討論

　　垂體泌乳素瘤是成人常見(jiàn)垂體腺瘤類型，占垂體腺瘤中的30%，占所有功能性垂體瘤中的60% [1]。泌乳素瘤有各種臨床表現(xiàn)、影像學(xué)表現(xiàn)和生物學(xué)行為。生殖期的婦女多為泌乳素微腺瘤(腫瘤直徑<10mm)，就診的原因多為泌乳素血癥，表現(xiàn)為月經(jīng)稀發(fā)、停經(jīng)、泌乳、性欲減退等。而男性患者和絕經(jīng)期婦女多為泌乳素大腺瘤(腫瘤直徑>10mm)，伴或不伴鞍外擴(kuò)展。除了有高泌乳素血癥表現(xiàn)外，還常因?yàn)槟[瘤的占位效應(yīng)出現(xiàn)頭痛，視力下降，視野縮小，顱神經(jīng)麻痹，垂體功能低下等表現(xiàn)，偶爾因?yàn)閴浩蕊D葉引發(fā)癲癇，阻塞腦脊液引流引起腦積水。垂體腺瘤是早應(yīng)用伽瑪?shù)吨委煹哪[瘤之一，1968年Leksell將伽瑪?shù)兑肷窠?jīng)外科學(xué)領(lǐng)域是一次重大的技術(shù)性突破。伽瑪?shù)吨委煷贵w瘤的原理是將聚焦的、高劑量的伽馬射線光子束一次性作用于腫瘤細(xì)胞，使病變組織盤狀壞死灶。垂體腺瘤是早應(yīng)用伽瑪?shù)吨委煹哪[瘤之一，目前對(duì)伽瑪?shù)吨委熋谌樗亓龅倪m應(yīng)證仍然存在一些爭(zhēng)論，大部分學(xué)者認(rèn)為伽瑪?shù)度匀皇撬幬镏委熂笆中g(shù)治療的補(bǔ)充。主要適應(yīng)證包括不愿意接受手術(shù)治療不能耐受藥物治療的微腺瘤;術(shù)后殘存的腫瘤，尤其是局部殘留腫瘤較多或在海綿竇內(nèi)者;復(fù)發(fā)腫瘤。P53基因早由Albert等于1979年發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)被認(rèn)為是腫瘤抗原，是一種原癌基因,直到1991年才被Levine等 [2]證實(shí)為抑癌基因。隨著研究的深入，P53成為目前被研究得廣泛的一種多功能的腫瘤抑制基因，50%~55%的人類腫瘤都包含了這種基因的突變。P53基因與放射治療敏感性有著密切的關(guān)系，一方面放射治療產(chǎn)生的放射性損傷改變P53表達(dá)水平;另一方面，腫瘤細(xì)胞的放射敏感性與P53基因的狀態(tài)有著密切的關(guān)系。在伽瑪射線等DNA損傷因子作用下，P53基因轉(zhuǎn)錄活性提高，P53蛋白翻譯后修飾改變，磷酸化、乙?；教岣?，使得P53蛋白水平明顯提高。腫瘤細(xì)胞放療的敏感性與其P53基因表達(dá)狀態(tài)有密切關(guān)系，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)P53突變的腫瘤細(xì)胞在大劑量射線照射后仍然存活，而與之相比表達(dá)野生型P53蛋白的腫瘤細(xì)胞在相對(duì)小劑量照射后就死亡。由此推測(cè)，P53基因突變對(duì)于放療敏感性有很大關(guān)系。而在臨床上放射治療較為敏感的腫瘤如髓母細(xì)胞瘤P53基因突變率較低，放射治療敏感性差的腫瘤如星型細(xì)胞瘤P53基因突變率高同樣提示P53可能與放療敏感性相關(guān)。P53基因影響放射敏感性的機(jī)制可能與DNA周期阻滯有關(guān)。一般來(lái)講S期細(xì)胞對(duì)放射性不敏感，而G1期細(xì)胞對(duì)射線敏感。射線誘導(dǎo)野生型P53蛋白表達(dá)，將DNA受損傷的細(xì)胞阻滯于G1期，或通過(guò)P53依賴性和P53非依賴型方式誘導(dǎo)DNA凋亡。而突變型P53干擾DNA受損的細(xì)胞G1期抑制，使其進(jìn)入S期增加;另外突變型P53蛋白DNA修復(fù)功能加強(qiáng)，減弱了射線對(duì)DNA損傷。野生型P53提高放療敏感性同時(shí)同時(shí)，放射性損傷同時(shí)也會(huì)提高P53基因突變率。突變的P53蛋白喪失其正常作用，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和惡性程度增加。Lim等[3]在9例放射治療引起的星形細(xì)胞瘤中檢測(cè)到11%P53基因突變以及55%P53免疫組化陽(yáng)性表達(dá)。本組病例伽瑪?shù)吨委熀驪53蛋白水平顯著高于非放療組，而侵襲性泌乳素瘤組P53蛋白水平明顯降低，說(shuō)明伽瑪?shù)犊赡苣軌蛞种颇[瘤增殖，降低其侵襲性。