創(chuàng)新性解析內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)化新分子機(jī)制

缺血性疾病包括缺血性心臟病、缺血性腦疾病和外周動(dòng)脈疾?。ㄈ纾盒募」Ｋ馈?dòng)脈粥樣硬化等），在現(xiàn)今仍具有較高的發(fā)病率和死亡率，對(duì)人類健康和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展構(gòu)成重大危害。目前開展的許多臨床試驗(yàn)表明促血管新生策略在缺血性疾病尤其是在缺血性心臟病的治療亟待新的突破。2月22日，心臟病全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院葛均波、李華團(tuán)隊(duì)就血管內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)分化新機(jī)制的研究成果以長(zhǎng)文Article形式在The Innovation期刊上正式上線發(fā)表（IF=32.1）為缺血性疾病的治療改善提供了全新的思路。

團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞在缺氧微環(huán)境中發(fā)生部分內(nèi)皮間質(zhì)化，改善缺血后微循環(huán)灌注，并詳盡闡明了其潛在的分子機(jī)制。該研究揭示了部分內(nèi)皮間質(zhì)化在缺血性疾病血管新生中的關(guān)鍵作用，并首在體內(nèi)外闡明轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4能夠通過NCOA3/NF-κb/Snail通路促進(jìn)缺血缺氧誘導(dǎo)的部分內(nèi)皮間質(zhì)化，改善缺血后血運(yùn)重建和組織修復(fù)。研究數(shù)據(jù)提示GTF2H4可能在缺血性疾病的靶向干預(yù)治療中具有一定醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化意義。

缺血缺氧環(huán)境誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生部分內(nèi)皮間質(zhì)化（EndMT）

葛均波、李華團(tuán)隊(duì)研究發(fā)現(xiàn)：在體實(shí)驗(yàn)中，小鼠心肌梗死后梗死邊緣區(qū)內(nèi)皮細(xì)胞逐漸獲得α-SMA間充質(zhì)標(biāo)記物；體外實(shí)驗(yàn)中，微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)缺氧處理后也獲得α-SMA、Fibronectin等間充質(zhì)標(biāo)記物，并伴隨有CD31和VE-Cadherin內(nèi)皮標(biāo)記物的部分丟失，內(nèi)皮細(xì)胞的成管功能仍得以完全保留，提示缺血缺氧誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生部分EndMT。

GTF2H4緩解缺氧誘導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，并促進(jìn)缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT

研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子GTF2H4對(duì)缺氧信號(hào)響應(yīng)，隨后確證了時(shí)序性缺氧與內(nèi)皮細(xì)胞中GTF2H4表達(dá)水平的關(guān)聯(lián)，并通過基因編輯技術(shù)證實(shí)GTF2H4能夠緩解缺氧誘導(dǎo)的微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，并正向調(diào)控缺氧誘導(dǎo)的部分EndMT。

GTF2H4通過自噬介導(dǎo)的降解路徑調(diào)控ERCC3，二者協(xié)同調(diào)控部分EndMT

研究團(tuán)隊(duì)開展4D-Label-Free蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選得到了GTF2H4的靶分子ERCC3，進(jìn)而，研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了GTF2H4與ERCC3二者之間的互作關(guān)系，并得出GTF2H4通過自噬介導(dǎo)的降解路徑調(diào)控ERCC3。

GTF2H4通過NCOA3 S1330位點(diǎn)的磷酸化調(diào)控NF-κB激活的部分EndMT

研究團(tuán)隊(duì)利用4D-Label-Free磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)聯(lián)合磷酸化蛋白質(zhì)通路芯片開展高通量通路富集，并通過雙熒光素酶、EMA等試驗(yàn)得出GTF2H4主要通過NF-κB/Snail這一信號(hào)通路調(diào)控部分EndMT。

深入研究中，針對(duì)NCOA3的1330位點(diǎn)進(jìn)行點(diǎn)突變?cè)O(shè)計(jì)，構(gòu)建磷酸化失活突變體S1330A和仿磷酸化突變體S1330E/D，得出GTF2H4能夠促進(jìn)NCOA3上1330位點(diǎn)的絲氨酸發(fā)生磷酸化，進(jìn)而結(jié)合p65以激活NF-κB-Snail通路，發(fā)生部分EndMT。

動(dòng)物在體研究中，實(shí)現(xiàn)小鼠下肢內(nèi)皮細(xì)胞GTF2H4高表達(dá)或敲低后，再構(gòu)建小鼠下肢缺血模型并動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)其下肢血流及恢復(fù)情況，發(fā)現(xiàn)GTF2H4能夠改善下肢缺血后血運(yùn)重建，伴隨部分EndMT發(fā)生。