幽門螺桿菌感染及環(huán)氧合酶2表達(dá)與胃癌變的關(guān)系

　作者：陳隨才　　作者單位：榆林市第二醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西 榆林 719000

　　【摘要】目的探討胃黏膜幽門螺桿菌(helicobactor pylori, H.pylori)感染、環(huán)氧合酶2(COX2)的表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系. 方法： 胃癌(GC)標(biāo)本80例，非典型增生(Dys) 40例，萎縮性胃炎(CAG) 30例，腸上皮化生(IM) 30例，淺表性胃炎(CSG) 30例，應(yīng)用免疫組化方法測定COX2蛋白的表達(dá)，用亞甲蘭染色檢測H.pylori. 結(jié)果： CSG，GC中H.pylori陽性和陰性病例COX2表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但在CAG，IM，Dys中的H.pylori陽性病例中COX2表達(dá)高于H.pylori陰性病例(52.9% vs 7.6%，52.6% vs 9.0%，67.9% vs 33.3%). 結(jié)論： H.pylori感染誘導(dǎo)COX2表達(dá)發(fā)生在胃癌形成的早期階段.

　　【關(guān)鍵詞】 胃腫瘤,癌前狀態(tài),螺桿菌,幽門 前列腺素內(nèi)過氧化物合酶

　　0引言

　　胃癌的發(fā)生是一個多階段、多因素的復(fù)雜發(fā)展過程. 至今，病因還沒有完全研究清楚，但近年的大量研究證實(shí)，H.pylori感染是胃癌病因中重要的環(huán)境因素之一，H.pylori感染誘導(dǎo)一個復(fù)雜免疫反應(yīng)，首先炎細(xì)胞聚集，然后導(dǎo)致增生，細(xì)胞因子釋放，終導(dǎo)致分子改變. 在被H.pylori上調(diào)的靶基因中，COX2在胃癌進(jìn)程中起重要作用，因此，COX2與腫瘤的關(guān)系倍受關(guān)注，COX2 是一種誘導(dǎo)型酶,其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系,并且可作為預(yù)防、治療腫瘤的靶分子,對其檢測具有重要的臨床意義. H.pylori感染及其誘導(dǎo)的COX2表達(dá)在胃黏膜病變轉(zhuǎn)變過程中的相關(guān)性尚不清楚. 我們檢測chronic superficial gastritis,chronic atrophic gastritis,intestinal me[x]taphasia,dysplasia和gastric carcinoma標(biāo)本中的H.pylori感染和COX2蛋白的表達(dá)，探討H.pylori感染及其誘導(dǎo)的COX2在不同胃黏膜病變中的表達(dá)情況，探討其表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，為胃癌的早期診斷及治療提供依據(jù).

　　1對象和方法

　　1.1對象200501/200612病理確診存檔組織蠟塊，術(shù)前未放、化療，年齡28~90(中位58)歲. 男125例，女85例. 其中GC標(biāo)本80例，CSG 30例，CAG 30例，IM 30例，Dys 40例. 常規(guī)制備4 μm連續(xù)切片4張，兔抗人COX2多克隆抗體、免疫組化SABC試劑盒及DAB顯色試劑盒，均購自武漢博士德生物工程有限公司. 亞甲蘭溶液配制：亞甲蘭11 g，硼酸1 g加蒸餾水100 mL.

　　1.2方法免疫組織化學(xué)染色采用SABC法： 新鮮配置H2O2孵育;微波修復(fù)抗原;滴加BSA封閉液，室溫30 min. 甩去多余液體，不洗;每張切片加1滴或50 μL抗體，4℃孵育過夜;滴加二抗，37℃下孵育20 min，PBS沖洗，5 min×3次;滴加試劑SABC，37℃下孵育20 min; PBS沖洗，5 min×3次;DAB顯色：每張切片加2滴或100 μL新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察5~10 min; 蒸餾水沖洗;自來水沖洗，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化，中性樹膠封片. COX2陽性染色主要位于細(xì)胞胞質(zhì)中,呈棕黃色彌漫性分布，間質(zhì)細(xì)胞(炎性細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞)和平滑肌細(xì)胞中亦可見散在部分表達(dá)，通過光學(xué)顯微鏡每張切片攝取5個高倍視野，計數(shù)陽性細(xì)胞個數(shù)，計算陽性細(xì)胞率， 以≤5%為0分,6%~25%為1分,26%~50%為2分,51%~75%為3分,76%~為4分，著色強(qiáng)度0分為陰性,1分為淺棕黃色(弱陽性),2分為棕黃色(陽性),3分為深棕黃色(強(qiáng)陽性). 每張切片的染色積分以這兩者的乘積表示. 另HP染色：石蠟切片61℃烤片40 min，脫蠟，梯度水化. 亞甲蘭溶液中染色1 min. 水洗涼干后用中性樹膠封固. H.pylori在400倍高倍鏡下觀察，以切片中腺腔內(nèi)找到深蘭色單個或多個聚集的短棒狀、弧狀、“S”狀桿菌為陽性(+)，否則為陰性.

　　統(tǒng)計學(xué)處理：組間率的比較采用χ2檢驗或精確概率法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義.

　　2結(jié)果

　　2.1胃黏膜感染率在CSG，CAG，IM，Dys，GC中H.pylori感染率分別為23.3%(7/30),56.7%(17/30),63.3%(19/30),70%(28/40),35%(28/80). CAG，IM，Dys的H.pylori感染率與CSG相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.94,χ2=6.71,χ2=10.60, P<0.01). GC的H.pylori感染率與CSG相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.37, P>0.05).

　　2.2胃黏膜 COX2的表達(dá)率COX2在CSG，CAG，IM，DYS，GC中的陽性表達(dá)率分別為10%(3/30)，33.3%(10/30)，36.6%(11/30)，57.5%(23/40)，72.5%(58/80)，CAG，IM，Dys的COX2陽性表達(dá)率與CSG相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.81，χ2=5.96，χ2=16.57，P<0.05,圖1). GC的陽性表達(dá)率與CSG相比差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=34.50，P<0.01).

　　2.3胃黏膜感染與COX2表達(dá)的關(guān)系CSG，GC中陽性和陰性病例COX2陽性表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(28.6% vs 4.0%，85.7% vs 65.4%)，但在CAG，IM，DYS中的陽性病例中COX2表達(dá)率高于陰性病例(52.9% vs 7.6%,52.6% vs 9.0%,67.9% vs 33.3%).

　　A: CAG; B: Dys; C: IM; D: 陰性對照; E: GC高分化; F: GC中分化.

　　圖1胃黏膜COX2表達(dá)SABC ×400

　　3討論

　　H.pylori已被認(rèn)為是慢性活動性胃炎、十二指腸球部潰瘍的重要致病因素，是胃癌的高危因素[1]. 胃癌是經(jīng)過炎細(xì)胞浸潤CAGIMDysGC的演變過程[2]. 我們的實(shí)驗結(jié)果顯示,H.pylori在CAG，IM，Dys的感染率與CSG相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05). GC的H.pylori感染率與CSG相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 胃癌H.pylori感染率為35%(28/80)，低于CAG，IM和Dys的檢出率,其原因可能是由于胃癌的發(fā)生改變了胃黏膜組織結(jié)構(gòu)和胃內(nèi)微環(huán)境,尤其是胃癌表面的壞死組織,不利于H.pylori繼續(xù)生長或胃癌組織釋放其中的破壞因子使局部H.pylori破壞崩解所致.

　　COX有2種亞型： 結(jié)構(gòu)型COX1和誘生型COX2，本研究結(jié)果顯示，COX2在CAG，IM，Dys中的表達(dá)率與CSG相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05). 在GC中的表達(dá)率與CSG相比差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，提示COX2表達(dá)可能是CSG發(fā)展到GC的分子標(biāo)志.

　　許多研究證實(shí)H.pylori是誘導(dǎo)COX2表達(dá)的重要因素, H.pylori感染和COX2的表達(dá)有明顯的相關(guān)性[3]，在H.pylori感染的胃黏膜中COX2 mRNA和蛋白表達(dá)明顯增加[4]，進(jìn)一步說明了H.pylori和COX2有著明顯的相關(guān)性[5]，樊薇等[6]研究結(jié)果顯示,在H.pylori感染的胃黏膜疾病中,COX2陽性表達(dá)率高于非H.pylori感染的胃黏膜病變,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),且在胃癌組二者差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，說明COX2的表達(dá)上調(diào)與H.pylori菌株感染有關(guān), H.pylori菌株感染通過介導(dǎo)COX2的表達(dá)上調(diào)，在胃癌的發(fā)生中起作用，這可能是H.pylori感染誘導(dǎo)胃黏膜細(xì)胞異常增殖及細(xì)胞凋亡進(jìn)而促使胃癌發(fā)生的重要機(jī)制. 本研究顯示,在CSG和GC中H.pylori陽性和陰性病例COX2表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但在CAG,IM和DYS的胃黏膜中H.pylori陽性病例的COX2表達(dá)率高于H.pylori陰性病例(P<0.05),提示H.pylori感染誘導(dǎo)COX2表達(dá)發(fā)生在胃癌形成的早期階段. 因此，在H.pylori感染的同時應(yīng)用非甾體類抗炎藥物可能對胃癌的防治起重要作用，這為腫瘤化學(xué)預(yù)防和治療提供了新思維.