丹參多酚鹽治療多臟器功能不全的實(shí)驗(yàn)研究

作者：穆德廣 金發(fā)光 楚東嶺 孫瑞琳    作者單位：(第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院呼吸內(nèi)科 西安710038)

【摘要】  目的：探討丹參多酚鹽體內(nèi)治療多臟器功能不全的作用。方法：健康大耳白兔24只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、內(nèi)毒素組、丹參多酚鹽干預(yù)組，每組8只。內(nèi)毒素組經(jīng)耳緣靜脈靜推LPS(1ml/kg)，12h后再由耳緣靜脈注射一次LPS(1ml/kg)，復(fù)制SIRS/MODS動(dòng)物模型;對(duì)照組耳緣靜脈靜推等量生理鹽水;丹參多酚鹽干預(yù)組于0h, 12h經(jīng)耳緣靜脈推注LPS(1ml/kg)并于次注入內(nèi)毒素后6h，12h，18h靜推丹參多酚鹽(50mg/kg)。于24h時(shí)間點(diǎn)測(cè)定各組動(dòng)物血清腫瘤壞死因子α (TNFα) 、白細(xì)胞介素1(IL1)、白細(xì)胞介素6(IL6)、血小板活化因子(PAF)。光鏡下觀察各組動(dòng)物臟器病理學(xué)變化。結(jié)果：丹參多酚鹽干預(yù)組與內(nèi)毒素組相比, IL1、IL6、PAF、TNFα均較內(nèi)毒素組有不同程度降低。丹參多酚鹽干預(yù)組臟器損傷組織學(xué)改變較內(nèi)毒素組明顯減輕。結(jié)論：丹參多酚鹽具有治療多臟器功能不全的作用，為防治MODS提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】  多臟器功能不全綜合癥; 丹參多酚鹽注射液; 內(nèi)毒素; 炎癥介質(zhì)

 在全身性炎癥反應(yīng)綜合癥/多器官功能障礙綜合癥(SIRS/MODS)發(fā)病過程中，機(jī)體產(chǎn)生大量有害炎癥介質(zhì)，其中白細(xì)胞介素1(IL1)、腫瘤壞死因子α (TNFα)發(fā)揮核心作用，造成組織器官病理變化。我們通過內(nèi)毒素所致感染性多器官功能障礙綜合癥動(dòng)物模型，觀察丹參多酚鹽治療多臟器功能不全的作用。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　丹參多酚酸鹽購于上海綠谷集團(tuán)。大耳白兔(購自第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心)，內(nèi)毒素(LPS)購于Sigma公司;兔TNFα、 IL1、PAF定量ELISA試劑盒購于上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司，IL6定量ELISA試劑盒購于第四軍醫(yī)大學(xué)免疫教研室。

　　1.2 方法

　　健康雄性兔24只,平均體重2kg。隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組、內(nèi)毒素組、丹參多酚鹽干預(yù)組。3組動(dòng)物均從耳靜脈給相應(yīng)藥物。內(nèi)毒素組于第0h及12h分別給予脂多糖(LPS)1mg/kg;正常對(duì)照組推注等量生理鹽水;丹參多酚鹽組:次靜推LPS后6、12、18h分次靜推丹參多酚鹽50mg/kg。

　　1.3 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法

　　分別在正常對(duì)照組注入生理鹽水，內(nèi)毒素組及丹參多酚鹽干預(yù)組注入內(nèi)毒素后于24h時(shí)間點(diǎn)將全部動(dòng)物放血活殺,采集靜脈血，離心分離上清，血清采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)腫瘤壞死因子α (TNFα)、白細(xì)胞介素1(IL1)、白細(xì)胞介素6(IL6)、血小板活化因子(PAF)。取出肺、腎、各一小塊組織,將標(biāo)本置入4%的多聚甲醛液中固定,石蠟包埋、切片,HE染色后光鏡觀察并照相。

　　1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

　　數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,用SPSS11.OR軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

　　2.1 肉眼觀察結(jié)果

　　正常對(duì)照組:兔外觀及各項(xiàng)體征正常;內(nèi)毒素組:兔出現(xiàn)皮溫升高、呼吸窘迫、反應(yīng)遲鈍、口唇發(fā)紺,部分動(dòng)物口唇有粉紅色泡沫液體溢出,各臟器均有不同程度腫脹、表面大小不等暗紅色斑片狀病灶,部分動(dòng)物腹腔內(nèi)有血性積液，SIRS/MODS動(dòng)物模型復(fù)制成功。

　　2.2 血清TNFα和IL6水平檢測(cè)結(jié)果

　　表1顯示,與正常對(duì)照組比較,內(nèi)毒素組TNFα及IL6有明顯升高,丹參多酚鹽干預(yù)組與內(nèi)毒素組比較IL6和TNFα均有不同程度降低,但仍高于對(duì)照組。表1 血清中TNFα、IL6含量變化　注：* P<0.05，與對(duì)照組比較; # P<0.05，與致傷組比較。

　　2.3 血清IL1和PAF水平檢測(cè)結(jié)果

　　表2顯示,與正常對(duì)照組比較,內(nèi)毒素組IL1、PAF有明顯升高,丹參多酚鹽干預(yù)組與內(nèi)毒素組比較IL1和PAF均有不同程度降低,但仍高于對(duì)照組。表2 血清中IL1、IL6、PAF含量變化注： * P<0.05，與對(duì)照組比較;# P<0.05，與致傷組比較。

　　2.4 病理學(xué)改變

　　內(nèi)毒素組:光鏡下肺、腎等臟器微血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集,微血栓形成。丹參多酚鹽干預(yù)組：鏡下肺、腎等臟器炎癥反應(yīng)較致傷組明顯改善，微血栓明顯減少。

　　光鏡下，內(nèi)毒素組肺組織肺泡壁增厚，腫脹，肺泡萎陷閉合，大量炎癥細(xì)胞侵潤，微血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集，微血栓形成。丹參多酚鹽干預(yù)組肺泡壁增厚及肺泡萎陷程度較內(nèi)毒素組減輕，炎癥細(xì)胞侵潤及微循環(huán)障礙明顯改善。

　　光鏡下內(nèi)毒素組可見腎小球毛細(xì)血管叢擴(kuò)張充血，腎小管上皮濁腫，透明變性，整個(gè)腎臟組織伴有中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤，同時(shí)伴有廣泛的微血栓形成。腎間質(zhì)可有水腫及灶狀炎性細(xì)胞浸潤。丹參多酚鹽干預(yù)組見腎臟組織充血，水腫減輕明顯，炎性細(xì)胞浸潤較輕。

　　3 討論

　　研究表明,TNFα 在SIRS/MODS發(fā)病機(jī)制中起重要作用[1～4]。TNFα可進(jìn)一步促進(jìn)IL1 、IL6、PAF等的生成和釋放使炎癥放大，促進(jìn)NO釋放引起低血壓，促進(jìn)中性粒細(xì)胞(PMN)和血管內(nèi)皮細(xì)胞(VEC)的粘附分子表達(dá)使引起兩種細(xì)胞間的粘附和相互作用等。TNFα 還可引起發(fā)熱反應(yīng)和促進(jìn)肝臟產(chǎn)生急性期反應(yīng)蛋白，促進(jìn)PMN和VEC的組織因子(TF)表達(dá)，從而引起凝血系統(tǒng)、補(bǔ)體系統(tǒng)、激肽系統(tǒng)和纖溶系統(tǒng)的連鎖式激活。

　　血小板活化因子(PAF)是一種重要的血管活性物質(zhì),在SIRS/MODS引起的病理改變過程中起重要作用[5,6]。PAF由白細(xì)胞、血小板及微血管內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生。PAF可以引起微血管通透性的改變。其作用機(jī)制包括:促進(jìn)NO的合成和釋放、TAX2的產(chǎn)生和IL1的合成和釋放。PAF還可引起中性粒細(xì)胞聚集,進(jìn)而增強(qiáng)微血管的通透性。PAF可通過激活白細(xì)胞、促進(jìn)氧自由基的產(chǎn)生,進(jìn)而調(diào)高粘附分子,并促使白細(xì)胞的粘附、聚集增強(qiáng),繼之以更多的氧自由基生成。

　　內(nèi)毒素作用機(jī)體后，誘導(dǎo)上述細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，并相互作用，引起一系列級(jí)聯(lián)放大的瀑布效應(yīng)，終導(dǎo)致成為SIRS/MODS發(fā)生、發(fā)展。

　　丹參多酚鹽的有效活性成份為丹參乙酸鎂,具有抗血小板積聚、抗凝、活血化瘀、消炎止痛等作用，是治療心腦血管疾病的常用藥。丹參多酚鹽是否可以減少致炎因子發(fā)揮抗炎作用,國內(nèi)外未見到報(bào)道。在本實(shí)驗(yàn)中,我們觀察家兔經(jīng)耳緣靜脈靜推內(nèi)毒素后，兔出現(xiàn)皮溫升高、呼吸窘迫、反應(yīng)遲鈍、口唇發(fā)紺,部分動(dòng)物口唇有粉紅色泡沫液體溢出,各臟器均有不同程度腫脹、表面大小不等暗紅色斑片狀病灶,部分動(dòng)物腹腔內(nèi)有血性積液，表明SIRS/MODS動(dòng)物模型復(fù)制成功。

　　家兔經(jīng)耳緣靜脈靜推內(nèi)毒素后，給予丹參多酚鹽治療后，動(dòng)物一般狀況較內(nèi)毒素組明顯改善。病理學(xué)顯示，內(nèi)毒素組試驗(yàn)動(dòng)物的肺、肝、腎臟明顯充血水腫，炎癥細(xì)胞大量侵潤，組織細(xì)胞出現(xiàn)腫脹壞死，微血管內(nèi)紅細(xì)胞聚集，微血栓形成。給予丹參多酚鹽治療組動(dòng)物上述臟器的病理改變明顯改善，表明丹參多酚鹽能有效治療內(nèi)毒素誘導(dǎo)的MODS。

　　本試驗(yàn)中家兔注入內(nèi)毒素后，細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)TNFα、IL1、IL6和PAF明顯升高，終導(dǎo)致家兔SIRS/MODS的發(fā)生和發(fā)展。而丹參多酚鹽治療組的家兔，血清中TNFα、IL1、IL6和PAF較內(nèi)毒素組顯著降低(P<0.05)，組織損傷明顯改善，表明丹參多酚鹽可體內(nèi)中和內(nèi)毒素的毒性作用，有效治療內(nèi)毒素誘導(dǎo)的SIRS/MODS，為臨床治療SIRS/MODS提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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