血細(xì)胞分析儀檢測(cè)方法與原理

1、電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法
　　 這是Coutler公司1987年推出的新技術(shù)，血球懸浮在電解液中，用一定的電流通過(guò)傳感器的內(nèi)外兩個(gè)電極，由于血細(xì)胞電阻抗很大，當(dāng)血細(xì)胞通過(guò)兩個(gè)電極時(shí)，電極間阻抗瞬間增大，形成幅度與血細(xì)胞體積成正比的電 脈沖，根據(jù)脈沖的大小可測(cè)出細(xì)胞的體積。在測(cè)量紅細(xì)胞時(shí)，利用一個(gè)脈沖甄別器，將幅度較小的血小板脈沖去掉，保留紅細(xì)胞和白細(xì)胞脈沖，因血液中白胞的數(shù)量不及紅細(xì)胞的1/500，故其總數(shù)據(jù)近似認(rèn)為是對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。在測(cè)量白細(xì)胞時(shí)，利用溶血素，使紅細(xì)胞溶解，再對(duì)剩下的白細(xì)胞計(jì)數(shù)。在對(duì)血小板計(jì)數(shù)時(shí)，調(diào)低脈沖甄別器的閾值，計(jì)出總數(shù)，減去紅細(xì)胞 的計(jì)數(shù)（其中已包括白細(xì)胞的計(jì)數(shù)），即為血小板計(jì)數(shù)。由于不同類型但體積相同的細(xì)胞產(chǎn)生的脈沖幅度相同，故僅靠體積是不能完全區(qū)分.
利用高頻電導(dǎo)法和激光散射分析白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)可以彌補(bǔ)這一缺陷。雖然細(xì)胞壁不能使低頻電流通過(guò)，但 能通過(guò)高頻電流，細(xì)胞核的大小和密度不同，它們對(duì)高頻電流的阻抗也不同，因此可用來(lái)區(qū)分白細(xì)胞。
激光散射技術(shù)主要用來(lái)檢查細(xì)胞膜表面特征和內(nèi)部結(jié)構(gòu)。激光散射對(duì)細(xì)胞顆粒的結(jié)構(gòu)和密度的區(qū)分能力強(qiáng)，粗顆粒產(chǎn)生的光散射比細(xì)顆粒強(qiáng)，借此可將粒細(xì)胞區(qū)分開來(lái)，美國(guó)COULTER公司的STKS、MAXM系列血細(xì)胞分析儀
五分類就是利用電阻法、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法。
2、光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)法
　　 利用激光散射和過(guò)氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類。嗜酸性粒細(xì)胞有很強(qiáng)的過(guò)氧化氫酶活性，中性粒細(xì)胞漿內(nèi)含有較為豐富的過(guò)氧化氫酶，單核細(xì)胞次之，原始細(xì)胞則極少，而淋巴細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞則缺管此酶。使用微量血液經(jīng)與含有清洗劑和甲醛的高滲液體進(jìn)行適當(dāng)稀釋并孵育幾十秒鐘，此時(shí)細(xì)胞被清洗劑所破壞，白細(xì)胞漿內(nèi)酶固定，此后繼續(xù)再進(jìn)行第二次反應(yīng)，加入過(guò)氧化氫和四氫一萘酚加熱，此時(shí)待測(cè)細(xì)胞中過(guò)氧化氫酶分解過(guò)氧化氫產(chǎn)生氧，后者使四氯一萘酚顯色并沉淀定位于含酶的顆粒中，此類細(xì)胞經(jīng)激光束，由于光散射及細(xì)胞大小不同 而被分類。顯然暑堿性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、原始細(xì)胞由于不含此酶，不能被檢測(cè)，因此一些儀器專門設(shè)置了嗜堿性 細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)，它的測(cè)量通道采用時(shí)間差的方法，與RBC/PLT的測(cè)量系統(tǒng)共用一個(gè)通道。由于試劑的作用，血液中 除嗜堿性細(xì)胞外，其它細(xì)胞均被溶解。嗜堿性細(xì)胞隨同其它細(xì)胞裸核量產(chǎn)生細(xì)胞分布圖。完整的嗜堿性細(xì)胞呈高 狹角散射，定位于圖上半部，裸粒位于下半部，不同裸粒因結(jié)構(gòu)不同，在X軸分布不同。單個(gè)核位于左方，分葉 越多越靠右方。計(jì)算機(jī)分析分葉核與單個(gè)核角散射峰比例，其比值即為分析儀所報(bào)告的結(jié)果。
TECHNICON H系列分析儀采用的就是這種技術(shù)。
3、電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法
　　 這種方法是分別采用四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)不同類型的細(xì)胞
①淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解，而使白細(xì)胞保持完整，細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài)，當(dāng)這些細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法（測(cè)量細(xì)胞體積）和射頻電導(dǎo)法（檢測(cè)細(xì)胞核和顆粒密度）的聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體。
②嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入特殊的溶血?jiǎng)?，除嗜酸性?xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外，其他細(xì)胞均被溶解或萎縮，再對(duì)保持完整的嗜酸性細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
③幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)：在細(xì)胞懸浮淮中加入硫化氨基酸，由于占位不同，結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多，且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?，?dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí)，成熟細(xì)胞被溶解，只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來(lái)計(jì)數(shù)。
　　 目前日本東亞公司的NE1500、SYSNEX公司的SE9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類的。
4、多角度激光偏振光散射檢測(cè)法
采用這種技術(shù)的儀器使用鞘流淮將標(biāo)本血稀釋，稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下，從細(xì)胞中分離出來(lái)。而鞘流的水份則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整，它與鞘流的折光系數(shù)相同，不影響白細(xì)胞的檢測(cè)。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來(lái)檢測(cè)通過(guò)激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光，0°前角散射光用來(lái)測(cè)定細(xì)胞的體積，10°狹角散射光用來(lái)測(cè)定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，90°垂直散射光對(duì)細(xì)胞內(nèi)部顆粒及細(xì)胞質(zhì)進(jìn)行測(cè)量，90°消偏振光散射將嗜酸性細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來(lái)。
ABBOTT公司的CD-3000，CD-3500血細(xì)胞分析儀采用了此技術(shù)。
　　 利用上述方法進(jìn)行五分類的儀器，終結(jié)果均呈現(xiàn)在高分辨率的白細(xì)胞分布圖上。運(yùn)用計(jì)算機(jī)圖象技術(shù)，以各種彩色象素代表一定的細(xì)胞濃度，使細(xì)胞亞群和異常情況易于識(shí)別，可以從三維空間的不同方位觀察分離的白細(xì)胞亞群。通過(guò)某種操作，使三維軸旋轉(zhuǎn)，就可展示不同方位的細(xì)胞分布情況。