PegIFNα治療期間ALT升高促進(jìn)表抗清除的免疫機(jī)制探索

中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院的高志良教授在分析珠峰項(xiàng)目的研究成果時(shí)曾多次提到，PEG-IFNα治療12周時(shí)ALT升高有利于HBsAg低水平（< 1500 IU/mL）的慢乙肝患者獲得HBsAg清除，既往也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，但PEG-IFNα治療期間ALT升高和HBsAg清除的免疫機(jī)制尚不清楚。

近期，高志良教授、林炳亮教授及李曉燕教授團(tuán)隊(duì)在Journal of Medical Virology雜志上發(fā)表的一項(xiàng)研究，深入探索了相關(guān)機(jī)制，結(jié)果表明在PEG-IFNα治療期間，以IFN-γ+ Th1亞群和M1巨噬細(xì)胞為代表的Ⅰ型炎癥反應(yīng)與ALT升高和HBsAg清除密切相關(guān)，IFN‐γ+ Th1通過誘導(dǎo)M1巨噬細(xì)胞極化，激活肝內(nèi)駐留記憶T細(xì)胞（TRM細(xì)胞），升高ALT水平，促進(jìn)HBsAg清除。

研究方法：

本研究共納入82例于2018 - 2020年在中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院就診的非肝硬化慢乙肝患者，患者曾接受NAs治療至少1年，qHBsAg < 1500 IU/mL，獲得HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換，HBV DNA < 20 IU/mL。入組后患者接受NAs（原方案）序貫聯(lián)合PEG-IFNα治療< 96周?；€定義為患者接受PEG-IFNα聯(lián)合NAs治療開始。在第0周（基線）、12周和24周時(shí)收集所有患者的血液樣本用于研究分析，每12周隨訪一次。

患者分為2組：臨床治組（n = 41）：在48周內(nèi)實(shí)現(xiàn)HBsAg清除（HBsAg < 0.05 IU/mL），當(dāng)患者獲得HBsAg清除時(shí)，繼續(xù)接受PEG-IFNα+NAs鞏固治療12 - 24周；未臨床治組（n = 41）：在48周時(shí)未獲得HBsAg清除。

鑒于PEG‐IFNα治療期間ALT升高與HBsAg清除相關(guān)，本文假設(shè)肝內(nèi)組織駐留記憶T細(xì)胞（TRM細(xì)胞）可能參與其中，并且以M1巨噬細(xì)胞（分泌細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素[IL]‐12、IL‐18）為代表的Ⅰ型炎癥反應(yīng)可能是TRM激活的關(guān)鍵因素。

研究結(jié)果：

1. PEG-IFNα聯(lián)合NAs治療，臨床治組在治療期間的ALT水平更高

在82例慢乙肝患者中，臨床治組基線時(shí)的年齡更?。≒ = 0.002），qHBsAg水平更低（P < 0.001）。臨床治組治療期間的HBsAg水平仍低于未臨床治組（12周: 1.40 vs. 2.71 log10 IU/mL, P12w < 0.001; 24周: -1.27 vs. 2.53 log10 IU/mL, P24w < 0.001）。兩組基線時(shí)的ALT水平相似，但臨床治組在治療期間的ALT水平更高（12周: 78 vs. 54 U/L, P12w = 0.002; 24周: 64 vs. 47 U/L, P24w = 0.004）。

2. PEG-IFNα治療獲得HBsAg清除與IFN‐γ+CD4+ T細(xì)胞有關(guān)

臨床治組0 - 24周時(shí)的IFN‐γ+CD4+ T細(xì)胞比例高于未臨床治組，但兩組間的腫瘤壞死因子（TNF）‐α+CD4+ T細(xì)胞比例相似，且兩組間的TNF‐α+CD8+或IFN‐γ+CD8+ T細(xì)胞的比例相似，提示CD4+ T細(xì)胞可能在HBsAg清除中發(fā)揮更重要的作用。

3. IFN-γ+ Th1細(xì)胞有利于PEG-IFNα治療獲得HBsAg清除

輔助性T細(xì)胞1（Th1細(xì)胞）屬于 CD4+ T 輔助細(xì)胞的一種促炎性細(xì)胞亞群，介導(dǎo)Ⅰ型炎癥反應(yīng)。本研究中，臨床治組0 - 24周時(shí)的IFN‐γ+ Th1細(xì)胞比例高于未臨床治組。臨床治組中TNF-α+ Th1和IFN-γ+ Th1的細(xì)胞比例從0周到24周呈輕度上升趨勢；但未臨床治組IFN-γ+ Th1細(xì)胞的比例呈動(dòng)態(tài)下降趨勢，在24周時(shí)達(dá)到低，低于基線水平。臨床治組的IFN-γ+ Th1細(xì)胞比例與治療期間HBsAg下降和ALT水平呈線性關(guān)系。提示IFN-γ+ Th1細(xì)胞與PEG-IFNα治療后的臨床治相關(guān)。

4. M1巨噬細(xì)胞極化與HBsAg清除相關(guān)

以往研究發(fā)現(xiàn)，Th1主要通過IFN-γ誘導(dǎo)M0巨噬細(xì)胞向M1巨噬細(xì)胞極化來發(fā)揮其促炎作用。本研究將患者血清與M0巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，臨床治組的M1（CD68+CD86+）巨噬細(xì)胞的比例高于未臨床治組，但兩組間血清誘導(dǎo)的M2（CD68+CD206+）巨噬細(xì)胞的比例相似，提示M1巨噬細(xì)胞極化在HBsAg清除中發(fā)揮重要作用。此外，IFNα促進(jìn)M1巨噬細(xì)胞極化并輕度抑制M2細(xì)胞極化。

5. M1巨噬細(xì)胞通過上調(diào)組織駐留記憶T細(xì)胞的效應(yīng)功能促進(jìn)HBsAg清除

組織駐留記憶T細(xì)胞（TRM細(xì)胞）在特定組織內(nèi)持續(xù)存在，對相應(yīng)組織內(nèi)的病原體監(jiān)測非常重要，尤其是對于肝臟，通常在T細(xì)胞活化后開始表達(dá)。本研究將M1和M2巨噬細(xì)胞上清液處理過的肝灌注液與HeG2.2.15細(xì)胞共培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)Kupffer細(xì)胞的M1極化通過上調(diào)ALT水平，促進(jìn)HBsAg清除。

此外，與M2巨噬細(xì)胞相比，經(jīng)M1巨噬細(xì)胞上清液處理，增強(qiáng)了肝內(nèi)TRM細(xì)胞的效應(yīng)功能，其分泌IFN‐γ、TNF‐α、穿孔素和顆粒酶B的能力增加。表明IFN-γ+ Th1通過誘導(dǎo)M1巨噬細(xì)胞極化激活肝內(nèi)TRM細(xì)胞，促進(jìn)HBsAg清除。

肝霖君有話說：

本研究證實(shí)，部分HBsAg低水平（< 1500 IU/mL）的NAs經(jīng)治慢乙肝患者聯(lián)合PEG-IFNα治療更易實(shí)現(xiàn)臨床治，其機(jī)制主要是通過調(diào)節(jié)免疫因子實(shí)現(xiàn)的，尤其是以Th1細(xì)胞和M1巨噬細(xì)胞為代表的Ⅰ型炎癥反應(yīng)。

首先IFN-γ+CD4+ T細(xì)胞可能有利于接受PEG-IFNα治療的慢乙肝患者獲得HBsAg清除；此外，PEG-IFNα治療可以上調(diào)IFN-γ+ Th1的表達(dá)，誘導(dǎo)M1巨噬細(xì)胞極化，激活肝內(nèi)TRM細(xì)胞，升高ALT水平，促進(jìn)HBsAg清除。

值得注意的是，未臨床治組在治療過程中的IFN-γ+ Th1細(xì)胞比例呈下降趨勢，低于臨床治組，或表明未臨床治組的部分HBV特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答尚未恢復(fù)到可以清除病毒的狀態(tài)，此時(shí)使用PEG-IFNα治療尚不能逆轉(zhuǎn)這種免疫狀態(tài)，此時(shí)選擇PEG-IFNα間歇治療可能更有利于這類患者獲得HBsAg清除