單克隆抗體在人類(lèi)巨細(xì)胞病毒感染領(lǐng)域的研究與應(yīng)用進(jìn)展

人類(lèi)巨細(xì)胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV）是常見(jiàn)的先天性感染病原體之一，屬于皰疹病毒科中結(jié)構(gòu)復(fù)雜的一種病毒，在大部分人群中存在隱性感染，當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)將出現(xiàn)活動(dòng)性HCMV感染，甚至危及患者生命。

HCMV(人類(lèi)巨細(xì)胞病毒)屬于疹病毒科乙組疤疹病毒亞科，是大的動(dòng)物病毒之一，其感染非常普遍。HCMV感染可以導(dǎo)致間質(zhì)性肺炎、免疫力受抑及器官植入失敗，其感染形式多呈隱性感染或潛伏感染。對(duì)于大多數(shù)人來(lái)說(shuō)，HCMV感染不是一個(gè)大問(wèn)題，但對(duì)于高?；颊邉t是危及生命的。當(dāng)機(jī)體免疫力降低時(shí)，潛伏狀態(tài)HCMV再活化而引起發(fā)病，如器官移植后接受免疫抑制劑治療、惡性腫瘤化療、HIV感染導(dǎo)致免疫缺陷或免疫抑制狀態(tài)。

HCMV結(jié)構(gòu)蛋白包括衣殼蛋白被膜蛋白以及包膜蛋白，研究廣泛的是后兩者，其中被膜磷蛋白和包膜糖蛋白抗原性強(qiáng)，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景。

有5種被膜磷蛋白研究比較清楚PP150、PP65、PP71、PP28和PP67。PP150的DNA序列和氨基酸序列與其他疹病毒無(wú)同源性，其抗原性在HCMV結(jié)構(gòu)蛋白中強(qiáng)，由于HCMV中還存在150kDa的衣殼蛋白，二者需雙向SDS-PAGE才易分開(kāi)并且需要免疫學(xué)鑒定因而限制了PP150的應(yīng)用；PP65是被膜蛋白中主要的一種，分子量為65kDa，它占被膜蛋白致密顆粒的95%，占整個(gè)病毒蛋白的15%在不同的HCMV毒株中，PP65具有高度保守性，整個(gè)感染周期中，PP65在感染細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，它在病毒感染及誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)中起重要作用，它不僅可誘導(dǎo)高水平的特異性循環(huán)抗體，而且能誘導(dǎo)特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)，目前其單克隆抗體在臨床上用于PP65血癥的診斷；PP28與其他疹病毒具有部分同源性，已有PP28DNA在大腸桿菌中表達(dá)獲得融合蛋白的報(bào)道，該融合蛋白可作為抗原檢測(cè)患者血清中相應(yīng)的抗體；PP67的單克隆抗體無(wú)中和活性。

包膜糖蛋白是病毒毒粒表面的抗原決定簇，是有包膜病毒表面脂質(zhì)雙層膜的重要成分，它們與病毒識(shí)別宿主細(xì)胞膜受體、吸附和穿入細(xì)胞病毒的致病作用以及誘導(dǎo)宿主的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。HCMV包膜上至少有8種以上可以用電泳技術(shù)區(qū)分的糖蛋白復(fù)合物，其中研究廣泛的是gB。gB是誘導(dǎo)產(chǎn)生抗HCMV中和抗體的主要抗原，目前受關(guān)注的是其中AD-1和AD-2兩個(gè)抗原決定簇。gB上的第552~635個(gè)氨基酸之間的區(qū)域即AD-1，被證實(shí)是HCMV感染后引發(fā)體液免疫的主要抗原決定簇。AD-1是一個(gè)復(fù)雜的結(jié)構(gòu)域，它包含一系列連續(xù)的長(zhǎng)度大于70bp的抗體結(jié)合位點(diǎn)。中和抗體與非中和抗體可以競(jìng)爭(zhēng)性地與AD-1結(jié)合，有學(xué)者用含AD-1所有結(jié)構(gòu)域的蛋白重組體來(lái)檢測(cè)與AD-1相結(jié)合的單克隆抗體的特異性及純化多克隆抗體的親和力，結(jié)果顯示所有單克隆抗體都擁有結(jié)合到重組蛋白的特有模式，說(shuō)明在AD-1含有與抗體結(jié)合的獨(dú)特位點(diǎn)，單克隆抗體與AD1的結(jié)合模式并不能預(yù)測(cè)單克隆抗體的中和活性。

抗AD-1的單克隆抗體阻止細(xì)胞與病毒融合的能力可達(dá)到20%~60%；AD-2的免疫原性很弱但被免疫系統(tǒng)識(shí)別后可以加強(qiáng)免疫保護(hù)作用。AD-2的單克隆抗體能有效阻止細(xì)胞與病毒的融合遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于抗AD-1的單克隆抗體，但兩種單克隆抗體對(duì)于硫酸乙酷肝素介導(dǎo)的病毒吸附都沒(méi)有阻止作用?？?/span>AD-2的單克隆抗體發(fā)揮中和病毒感染作用的機(jī)制可能是阻止了在病毒與細(xì)胞接觸初期受體與配體的結(jié)合過(guò)程，還有研究將抗AD-2的單克隆抗體的單鏈可變區(qū)制備成單體形式和二聚體形式，研究它們的中和作用及與AD-2作用的動(dòng)力學(xué)發(fā)現(xiàn)單體形式無(wú)中和作用，而二聚體形式盡管會(huì)與相結(jié)合的gB發(fā)生緩慢的解離，但卻有中和活性。

鼠源性抗體在臨床應(yīng)用中可能會(huì)出現(xiàn)免疫原性，導(dǎo)致患者體內(nèi)出現(xiàn)抗抗體，還有可能出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，因此限制了其應(yīng)用。利用抗體人源化技術(shù)可以輕松解決免疫原性這一難題。

抗體人源化是指通過(guò)DNA重組技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)，將鼠源單克隆抗體的大部分氨基酸人源化，以降低其異源性，保留親本鼠單克隆抗體的親和力和特異性，這種通過(guò)基因重組所表達(dá)的抗體既有鼠源成分，又有人源成分，所以稱(chēng)為人源化抗體 SHAPE \* MERGEFORMAT

優(yōu)勢(shì)：

抗體人源化團(tuán)隊(duì)經(jīng)驗(yàn)豐富，技術(shù)專(zhuān)家擁有成功研制上市的治療性抗體藥物項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)

擁有自主開(kāi)發(fā)的高表達(dá)載體及細(xì)胞系，以及具有商業(yè)開(kāi)發(fā) license 的細(xì)胞系

具有一站式從細(xì)胞系開(kāi)發(fā)，到發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化，再到 150L 細(xì)胞罐發(fā)酵，完成整個(gè)治療性抗體的研發(fā)能力

國(guó)內(nèi)許多學(xué)者也進(jìn)行了HCMV單克隆抗體的篩選，但大多數(shù)目的是用于抗原血癥的早期準(zhǔn)確檢測(cè)。兩個(gè)或多個(gè)特異性強(qiáng)的重組抗原聯(lián)合使用制備特異性診斷性抗體，將是進(jìn)一步的研究方向。理論上講在感染初期使用McAbs可中和病毒顆?；罨苁共《靖腥炯?xì)胞溶解的補(bǔ)體，從而防治HCMV感染但隨著感染的發(fā)展，HCMV已整合到宿主細(xì)胞的細(xì)胞核中，并大量復(fù)制而誘發(fā)各種臨床綜合征，因此早期診斷、早期用藥就至關(guān)重要。