慢性馬兜鈴酸腎病患者血清TGF-β1 、BMP-7的改變

【摘要】目的：探討慢性馬兜鈴酸腎病(CAAN)患者血清轉化生長因子-β1(TGF-β1 )、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)的變化及臨床意義。方法：采用ELISA法測定30例CAAN患者血清TGF-β1 及BMP-7水平，并用20例正常健康人作對照。結果：與對照組相比病例組TGF-β1明顯增高(P<0.05)，BMP-7明顯降低(P<0.05)。TGF-β1 與 BMP-7呈負相關(r=-0.379，P<0.05)。結論：TGF-β1 、BMP-7二者的表達水平及其相互間調(diào)節(jié)作用是慢性馬兜鈴酸腎病發(fā)病機制中的重要環(huán)節(jié)。
　　【關鍵詞】 慢性AAN;轉化生長因子-β1;骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7

　　Abstract： ob[x]jective：To explore the change of serum TGF-β1 and BMP-7 in patients with chronic aristolochic acid nephropathy (CAAN) and its clinical significance. Methods： The level of TGF-β1 、BMP-7 of the serum from 30 CAAN patients was determined by ELISA. And 20 healthy adults were selected as a control group.Results： The concentration of TGF-β1 in serum in CAAN patients was significantly higher than that in the control group(P<0.05).The BMP-7 in serum in CAAN patients was significantly lower than that in control group (P<0.05). For all patients， there was a significant negative relation between the TGF-β1 and BMP-7 level(r=-0.463，P<0.05).Conclusion：The ex[x]pression of TGF-β1 and BMP-7 as well as its mutual regulation is an important stage of CAAN pathogenesis.

　　Key words：CAAN; TGF-β1; BMP-7

　　馬兜鈴酸腎病(Aristolochic Acid Nephropathy， AAN ) 是指服用含有馬兜鈴酸的中藥及其制劑所引起的腎臟損害。AAN的發(fā)病機制可能與馬兜鈴酸可引起間質(zhì)成纖維細胞及腎小管上皮細胞損害，繼而出現(xiàn)腎小管的萎縮和間質(zhì)纖維化有關。目前普遍認為：TGF- β1 是主要的前纖維化因子; 而BMP-7是抑制腎纖維化的一個重要因子。本實驗通過對比分析健康對照組與實驗組CAAN患者血清TGF-β1 、BMP-7的變化，為CAAN的治療提供理論依據(jù)。
　　1 資料與方法
　　1.1 一般資料
　　實驗組 共選取30例符合慢性馬兜鈴酸腎病診斷的患者，均來源于我院住院及門診患者，男女不限，年齡25～75歲。全部病例均未經(jīng)透析治療，給予低蛋白低磷飲食，并進行相應的降壓、利尿、消腫、糾正水和電解質(zhì)紊亂等治療。對照組：同期健康體檢者20例，男女不限，年齡25～75歲，均為本院體檢中心提供的健康人，無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，肝腎功能正常。
　　1.2 實驗方法

　　采全部研究對象晨起空腹靜脈血3mL，靜置30min鐘后，3000轉離心10min分離血清，分裝于Eppendorf管中密封，置一70℃保存待用。待標本集中后采用酶聯(lián)免疫吸附法統(tǒng)一檢測TGF-β1 、BMP-7含量。
　　1.3 統(tǒng)計學處理
　　SPSS，采用t檢驗和方差分析法，結果以均數(shù)±標準差(x±s)表示，P<0.05為具有統(tǒng)計學意義，并且對TGF-β1與BMP-7 進行Sperman 相關性分析。
　　2 結果

　　2.1 病例組與健康對照組血清TGF-β1、BMP-7含量比較

　　見表1。表1 病例組與健康對照組血清TGF-β1、BMP-7測定結果

　　2.2 血清TGF-β1 、BMP-7含量的相關性分析
　　通過Sperman 相關性分析， 血清TGF-β1 與 BMP-7呈負相關(r=-0.379，P<0.05)。
　　3 討論

　　在腎間質(zhì)纖維化的進程中，細胞因子、生長因子均發(fā)揮著重要作用。TGF-β1是目前研究多的與器官纖維化密切相關的細胞因子。BMP一7是為數(shù)不多的抑制纖維化的因子之一，其在腎間質(zhì)纖維化中的作用逐漸被國內(nèi)外醫(yī)學工作者所關注。本實驗觀察到，健康組血清TGF-β1基本無表達或有微弱表達，而CAAN患者血清中TGF-β1的表達升高，證明TGF-β1參與慢性馬兜鈴酸腎病腎小管間質(zhì)損害的過程。骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP一7)是轉化生長因子超家族的成員之一，對于調(diào)節(jié)細胞生長、分化和凋亡，調(diào)控許多組織的發(fā)育和形態(tài)維持起著重要作用[1,2]。腎臟中有豐富的BMP一7表達[3]，也有BMP一7受體表達[4]，提示BMP一7可能通過自分泌和旁分泌的途徑來調(diào)節(jié)腎臟功能。有研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病腎病、急性腎衰和梗阻性腎病模型中均發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性BMP一7表達的減少，給予外源性BMP一7后，可以緩解腎臟病變，保護腎功能[5～8]，提示BMP一7可能對腎臟起保護作用。通過免疫組化實驗，本研究亦發(fā)現(xiàn)，隨著病情發(fā)展BMP-7的表達逐漸減少，與腎間質(zhì)的損害程度成負相關，說明BMP一7表達下降參與了慢性馬兜鈴酸腎病中腎間質(zhì)纖維化的進展。BMP一7對于腎臟的保護作用，可能與拮抗TGF-β1促進纖維化有關。TGF-β1既能促進ECM的生成，還能直接或間接的抑制ECM降解，是腎間質(zhì)纖維化過程中的不可或缺的關鍵因子，國內(nèi)周建鋒等[9]研究發(fā)現(xiàn)在單側輸尿管結扎的大鼠BMP一7于早期腎小管間質(zhì)病變時即出現(xiàn)表達下降，相對于腎間質(zhì)纖維化的出現(xiàn)要早，其表達與腎間質(zhì)中的TGF-β1，呈負相關，并伴隨腎間質(zhì)纖維化的進展進行性下降，BMP一7表達量的下降可能與介導腎小管間質(zhì)損傷過程有關。Zeisberg[10,11]等研究發(fā)現(xiàn)，BMP一7能夠通過阻斷TGF-β1在細胞內(nèi)的信號傳導，而逆轉腎小管上皮細胞向間質(zhì)的轉化，達到恢復腎小管穩(wěn)態(tài)，改善腎功的目的。由此推測，TGF-β1 和BMP-7可能作為一對相互拮抗的因子而起作用。當平衡向TGF-β1一方移動時，腎間質(zhì)纖維化就進展。當平衡向BMP一7一方移動時，則抑制腎間質(zhì)纖維化。這為我們臨床治療馬兜鈴酸腎病，延緩腎間質(zhì)纖維化的進展可能提供了一個新的治療靶向。
　　【參考文獻】
　　[1]Hogan BL. Bone morphogenetic proteins： multifunctional regulators of vertebrate development[J].Genes & Dev， 1996,10(13)：15801594

　　[2]Kopp JB.BMP receptors in kidney[J].Kidney Int,2000,58(5)：22372238

　　[3]Lyons KM， Hogan BL， Robertson EJ. Colocalization of BMP7 and BMP2 RNAs suggests that these factors cooperatively mediate tissue interactions during murine development[J].Med Dev,1995,50(1)：7183

　　[4]Bosukonda D，Shih MS，Sampath KT，et al.Characterrization of receptors for osteogenic protein-1/bone morphogenetic proteins(OP-1/BMP-7) in rat[J].Kidney Int,2000,58(5)：19021911

　　[5]Wang SN，Lapage J， Hirschberg R. Loss of Tubular Bone Morphogenetic Protein-7 in Diabetic Nephropathy[J].J Am Soc Nephro1,2001,12(11)：23922399

　　[6]Hruska KA，Guo G， Wozniak M， et al.Osteogenic protein-1 renal fibrogenesis associated with ureteral obstruction[J].Am J Physiol Renal Physiol,2000,279(1)：130143

　　[7]Morrissey J，Hruska K，Guo G，et al.Bone morphogenetic protein-7 improves renal fibrosis and accelerates the return of renal function[J].J Am Soc Nephrol,2002,13(1);S1421

　　[8]Almanzar MM， Frazier KS， Dube PH， et al. Osteogenic protein-1 mRNA ex[x]pression is selectively modulated after acute ischemic renal injury[J].J Am Soc Nephrol,1998,9，(8)：14561463

　　[9]陳文， 湛貽璞. 馬兜鈴酸腎病的診斷與治療[J]. 醫(yī)師進修雜志，2003,26(5)：1112

　　[10]ZeisbergM， ShahAA， Kalluri R. Bone morphogenetic Protein一 7 induces mesenchymal to lepithelial transition in adult renal fibroblasts and facilitates regeneration of injured kidney[J].J Biol Chem， 2005,280(9)：80948011

　　[11]Zeisberg M，Hanai J，Sugimoto H，et al. BMP-7 counteracts TGF-beta1-induced epithelial-to-mesenchymal transition and reverses chronic renal injury[J].Nat Med,2003,9(7)：964968