原發(fā)性干燥綜合征患者T細(xì)胞亞群及CD4+CD25+T細(xì)胞檢測的意義

作者：覃羽華1,岑光旅2,韋葉生1　　作者單位：1.?右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，廣西?百色?533000E-mail:qinyvhua@163.com;2.?廣西百色市人民醫(yī)院，右江民族醫(yī)學(xué)院附屬西南醫(yī)院，廣西?百色?533000;3.?南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院，廣東?廣州?510515

　　【摘要】目的探討T淋巴細(xì)胞亞群及CD4+CD25+T細(xì)胞在原發(fā)性干燥綜合征(PSS)患者中的檢測意義。方法用流式細(xì)胞儀檢測18例PSS患者以及20例健康體檢者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK細(xì)胞(CD3-/CD16+56+)、CD3+CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞及CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞水平。結(jié)果PSS患者與正常對照組比較，CD3+CD4+細(xì)胞亞群的百分率明顯升高(P<0.05);CD4+/CD8+與對照組比較有明顯升高(P<0.05);CD3+CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的百分率明顯降低(P<0.01)，其它T細(xì)胞亞群無明顯變化。結(jié)論P(yáng)SS患者T淋巴細(xì)胞亞群的水平是異常的。T細(xì)胞亞群的比例異常與疾病的病程和臨床表現(xiàn)相關(guān)聯(lián)。CD3+CD4-CD8-和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平降低導(dǎo)致機(jī)體自身免疫反應(yīng)抑制功能減弱，免疫耐受狀態(tài)被打破，可能是引發(fā)PSS發(fā)生發(fā)展的重要因素。
　　【關(guān)鍵詞】 干燥綜合征;T淋巴細(xì)胞;CD4+CD25+;CD3+CD4-CD8-

　　Abstract:ob[x]jectiveTo investigate the significance of T lymphocyte subsets and CD4+CD25+ T cells detection in patientswith primary Sjogren syndrome (PSS).MethodsAflow cytometry was use to detect the levels of peripheral blood CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD3-/CD16+56+ of NK cells, double negative T cellsof CD3+CD4-CD8- and CD4+CD25+ which regulate the levels of T cells in18 patients with PSS, and compared with 20 healthy subjects (as normal control group).ResultsCompared with normal control group, the percentage of PSS patients' CD3+CD4+cell subsets were significantlyelevated (P<0.05); CD4+/CD8+ was also significantly higher (P<0.05);double negative T cells of CD3+CD4-CD8- and CD4+CD25+ which regulatethe levels of T cells decreased significantly (P<0.01), other T cell subsetsremained the same.ConclusionThe levels of Tlymphocyte subsets in patients with PSS is abnormal. The proportion of T cell subsets abnormalities was associated with the course and clinical manifestations of the disease. The decreased CD3+CD4-CD8-and CD4+CD25+ which regulatethe levels of T cells resulted in weakening self immune suppression, and immune tolerance has been broken, they may be important factors which induced the genesis and development of PSS.

　　Key words:Sjogren’s syndrome; T cell subsets; CD4+CD25+;CD3+CD4-CD8-

　　干燥綜合征(Sjogren’s syndrome，SS)是一種抗原驅(qū)動、T細(xì)胞介導(dǎo)、B細(xì)胞活化的慢性自身免疫性疾病，該病可分為原發(fā)性和繼發(fā)性。原發(fā)性干燥綜合征(PSS)的發(fā)病機(jī)制涉及遺傳、免疫、環(huán)境等多種因素。近年來發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cells,Treg細(xì)胞)在維持外周耐受和抑制自身免疫性方面發(fā)揮著重要的作用[1]。目前調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在PSS的發(fā)病與免疫調(diào)節(jié)中的作用成為研究點(diǎn)，國內(nèi)外有關(guān)這方面的文獻(xiàn)報道不多。為此筆者用流式細(xì)胞儀檢測18例PSS患者外周血T細(xì)胞亞群及CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平，以探討其細(xì)胞免疫功能狀態(tài)和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在PSS發(fā)病中的意義。
　　1對象與方法
　　1.1對象①PSS組：選擇研究對象為本院門診或住院(2008年11月～2010年3月)初發(fā)未經(jīng)治療的PSS患者18例，均符合2002年制定的SS國際分類(診斷)標(biāo)準(zhǔn)，男4例，女14例，年齡34～62歲，平均43.5歲。②正常對照組：20例，男8例，女12例，年齡28～58歲，平均40.2歲，均為醫(yī)院健康體檢和醫(yī)務(wù)工作者。
　　1.2試劑和儀器實(shí)驗(yàn)中使用三標(biāo)記單克隆抗體CD3-PC5/CD4-FITC/CD8-PE，雙標(biāo)記單克隆抗體CD3/CD16+CD56-PE，CD4-FITC，CD25-PE，均購自BECKMAN COULTER公司產(chǎn)品。流式細(xì)胞儀型號為美國BD公司FACSCalibur型。
　　1.3方法分別在兩個試管中先加入擬標(biāo)記抗體10μl，再加入EDTA抗凝的外周靜脈血50μl(另設(shè)一管陰性對照)，輕微振蕩混勻，室溫避光放置15min，每管加入溶血劑300μl充分混勻，室溫避光放置15min，待完全溶血后1 200r/min離心5min，棄去上清，加入1 000μl鞘液混勻，1 200r/min離心5min，棄上清，加鞘液500μl，充分混勻使細(xì)胞懸浮，流式細(xì)胞儀檢測，每管獲取細(xì)胞10 000個。T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞及CD4+CD25+T細(xì)胞的測定結(jié)果用CellQuest 軟件分析。
　　1.4統(tǒng)計學(xué)分析計量數(shù)據(jù)以(±s)表示，顯著性檢驗(yàn)用配對t檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)在SPSS 10.0軟件上進(jìn)行統(tǒng)計。
　　2結(jié)果

　　與正常對照組相比，PSS患者組CD3+、CD3+CD4-CD8+、CD3-/CD16+56+所占T淋巴細(xì)胞的百分率無明顯改變。CD3+CD4+CD8-細(xì)胞亞群的百分率有所升高(P<0.05);CD4+/CD8+與對照組比較有明顯升高(P<0.05);CD3+CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞及CD4+CD25+調(diào)節(jié)T細(xì)胞的百分率明顯降低，兩組比較差異有高度顯著性(P<0.01)。結(jié)果見表1。圖1為流式細(xì)胞儀檢測CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞水平的結(jié)果圖，A為正常對照圖，B為1例PSS患者外周血檢測結(jié)果圖。表1PSS患者T細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的水平分析圖1外周血CD4+CD25+T細(xì)胞流式細(xì)胞圖
　　3討論

　　PSS是我國臨床常見的彌漫型結(jié)締組織病之一，其主要的病理損傷是淋巴細(xì)胞浸潤，常受累的是唾液腺和淚腺等外分泌腺，并可累及肺、腎臟、肝臟以及血管等多個臟器[2]。國外有些研究表明[3,4]，PSS的發(fā)病與T淋巴細(xì)胞亞群的變化相關(guān)。本觀察通過對PSS患者外周血T細(xì)胞亞群和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的測定，提示患者組CD3+、CD3+CD8+、CD3-/CD16+56+所占T淋巴細(xì)胞的百分率無明顯改變;CD3+CD4+細(xì)胞亞群的百分率有所升高(P<0.05);CD4+/CD8+與對照組比較有明顯升高(P<0.05)。過多的CD4+T細(xì)胞局部浸潤，CD4+/CD8+比值增高，有利于局部產(chǎn)生自身免疫性疾病的自身抗體，從而導(dǎo)致腺泡或腺管的損傷和破。本研究表明了患者免疫失調(diào)，細(xì)胞免疫功能增強(qiáng)，反映了機(jī)體整體的自身免疫調(diào)節(jié)功能處于紊亂狀態(tài)。
　　在研究結(jié)果中顯示了CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例明顯低于正常對照組，與厲小梅等　　[5]研究的結(jié)果相一致。健康的個體中存在著少量具有潛在致病性的自身反應(yīng)性T細(xì)胞，Treg細(xì)胞對自身反應(yīng)T細(xì)胞激活和擴(kuò)增起負(fù)調(diào)控作用。CD4+CD25+ Treg細(xì)胞可通過直接接觸或　分泌抑制性細(xì)胞因子(TGF-β、IL-10等)抑制自身免疫性疾病的發(fā)生，維持外周自身耐受，該細(xì)胞減少則會導(dǎo)致各種自身免疫性疾病的發(fā)生。有研究發(fā)現(xiàn)[6]，將CD4+CD25-脾細(xì)胞接種于無免疫活性動物后，可導(dǎo)致動物產(chǎn)生自身免疫性疾病，而將CD4+CD25-T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為CD4+CD25+T細(xì)胞后則可有效阻止動物自身免疫疾病的發(fā)生。本研究亦發(fā)現(xiàn)PSS患者DNTreg細(xì)胞明顯低于正常對照組，從而表明PSS患者自身免疫耐受的功能受到抑制。研究表明[7]，CD3+CD4-CD8-雙陰性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(DN Treg細(xì)胞)在體外被激活后，可產(chǎn)生IL-4和IL-10或通過與靶細(xì)胞直接接觸后，DN T細(xì)胞表面FasL與靶細(xì)胞表面Fas相互作用，導(dǎo)致靶細(xì)胞凋亡，這就顯示DN Treg細(xì)胞具有一定的抑制性免疫調(diào)節(jié)功能。這些Treg細(xì)胞具有免疫抑制功能，能夠抑制CD4+、CD8+細(xì)胞的活化與增殖，是維持機(jī)體免疫耐受的重要組成部分，Treg細(xì)胞數(shù)量的下降可能在PSS發(fā)病中起到重要的作用。今后將增加標(biāo)本量，進(jìn)一步對DN Treg細(xì)胞和CD4+CD25+ Treg細(xì)胞進(jìn)行研究，以便更深入全面地發(fā)現(xiàn)其在PSS疾病中的表達(dá)規(guī)律，探討Treg細(xì)胞干預(yù)治療的可行性，尋找有效的調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的治療方法則是未來的研究方向。
　　【參考文獻(xiàn)】
　　[1]LanR Y, Ansari A, LianZ X, et al. Regulatory T cells development function and role in autoimmunity [J]. Autoimmun Rev,2005,4(6):351-363.

　　[2]顏淑敏,曾小峰.原發(fā)性干燥綜合征診治進(jìn)展[J].實(shí)用醫(yī)院臨床雜志,2007,4(3):6-8.

　　[3]Manel T, Bredberg A, Jacobsson LT, et al. CD4+T lymphocytopenia-a frequent finding in anti-SSA antibody serupositive patients with primary Sjogren's syndrome [J]. J Rheumatol,2004,31(4):726-728.

　　[4]Gottenberg JE, Lavie F, Abbed K, et al. CD4CD25 high regulatory Tcells are not impaired in patients with primary Sjogren's syndrome [J]. J Autoimmun,2005,24(3):235-242.

　　[5]厲小梅,李向培,錢龍,等.CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在干燥綜合征患者外周血和唇腺組織的表達(dá)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2007,87(15):1034-1036.

　　[6]Cheney KM, Kumar R, Purins A, et al. HIV type 1 persistence in CD4-/CD8- double negative T cells from patients on antiretro-viral therapy [J]. AIDS Res Hum Retroviruses,2006,22(1):66-75.

　　[7]李冬梅,厲小梅,李向培,等.原發(fā)性干燥綜合征患者外周血CD4+CD25+CD127LOW/-T細(xì)胞的檢測及意義[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2009,44(4):482-486.