生化分析儀的校準(zhǔn)

一個(gè)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定結(jié)果的可靠性是由其精密度、準(zhǔn)確性及可比性所決定的，一般必需從下面幾方面著手。
一． 選好測(cè)定方法；
二． 購買質(zhì)量過硬的試劑盒；
三． 要有質(zhì)優(yōu)的測(cè)試儀器；
四． 必需進(jìn)行正確的校準(zhǔn)；
五． 還要規(guī)范化操作；
六． 搞好過硬的室內(nèi)質(zhì)量控制；
七． 積極參加室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)；
八． 還要有一支素質(zhì)高的隊(duì)伍。
現(xiàn)就生化分析儀的校準(zhǔn)問題提出個(gè)人看法。
一、 校準(zhǔn)的重要性和必要性
首先必須明確生化分析儀不論如何先進(jìn)，它還是一個(gè)比較器，它測(cè)試出來的標(biāo)本結(jié)果是隨著標(biāo)準(zhǔn)限的設(shè)置不同而變化的。所以，在衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心擬定的“臨床實(shí)驗(yàn)室（定量測(cè)定）室內(nèi)質(zhì)控工作指南”中明確指出“對(duì)測(cè)定標(biāo)本的儀器一定要求進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)時(shí)要選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品；如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或/和參考物質(zhì)；對(duì)不同的分析項(xiàng)目要根據(jù)其特性確立各自的校準(zhǔn)頻率。”這說明校準(zhǔn)儀器是室內(nèi)質(zhì)控的重要部分，強(qiáng)調(diào)了校準(zhǔn)工作的必要性和重要性，同時(shí)指出了校準(zhǔn)的方法和要求。
二、 確立測(cè)定系統(tǒng)的概念\r
對(duì)于一個(gè)臨床檢測(cè)項(xiàng)目，如果所用方法的測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品中任何一個(gè)不同，都可能得到不同的測(cè)定結(jié)果。因此，測(cè)定系統(tǒng)包括測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四要素。如果我們想要得到準(zhǔn)確可靠的測(cè)定結(jié)果，而該結(jié)果又具有與國際、國內(nèi)其他實(shí)驗(yàn)室的可比性，應(yīng)該自己建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定系統(tǒng)。在全自動(dòng)生化分析儀上使用配套的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，即日立7170使用寶靈曼的試劑和校準(zhǔn)品（c.f.a.s），在貝克曼CX-7生化分析儀上使用貝克曼的試劑和校準(zhǔn)品等。各儀器廠家均有自己的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定系統(tǒng)。對(duì)于校準(zhǔn)品不能亂用，如不能用貝克曼的校準(zhǔn)品校準(zhǔn)日立生化儀，同樣也不能用寶靈曼的校準(zhǔn)品去校準(zhǔn)貝克曼生化儀。
三、 校準(zhǔn)品和質(zhì)控品
校準(zhǔn)品（Calibration materials）含有已知量的欲測(cè)物，用以校準(zhǔn)該測(cè)定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。因此好為人血清基質(zhì)，以減少基質(zhì)效應(yīng)造成的誤差。
質(zhì)控品（Control materials）只用于和待測(cè)標(biāo)本同時(shí)測(cè)定的，為了控制標(biāo)本的測(cè)定誤差，因此要求保存時(shí)間十分穩(wěn)定。前者是校準(zhǔn)其值而后者是控制誤差用的。
四、 校準(zhǔn)前準(zhǔn)備
1 .了解燈泡已使用多久？檢查飄移是否合乎要求；
2． 檢查比色杯的清潔及磨損情況？必要時(shí)進(jìn)行更換；
3． 用清潔劑泡洗管道
4． 測(cè)定儀器的精密度及線性是否達(dá)到儀器性能要求？

五、 定值質(zhì)控血清是否可以校準(zhǔn)儀器？
我們?cè)谙嗤瑮l件下，同時(shí)用五個(gè)進(jìn)口產(chǎn)品，每家兩種不同濃度的定值如TP、ALB、UREA、UA、ALP、GGT、CK、HBDH、LD、AMY等，在日立7170A上進(jìn)行測(cè)定(用常規(guī)試劑)，詳見質(zhì)控血清對(duì)部份常規(guī)測(cè)定項(xiàng)目（如T、ALB、UREA、Cr、UA、K、Na、Cl、AST、ALT）結(jié)果與靶值比較：
表 不同廠家定值質(zhì)控對(duì)TP、ALB、、AST、ALP結(jié)果與靶值比較
TP ALB UREA AST ALP
T 偏差% T 偏差% T 偏差% T 偏差% T 偏差%
汽巴康寧1 57 4.39 29 0 5.0 4.5 43 -10.5 96 4.2
汽巴康寧2 46 4.89 24 2.08 19.3 -5.76 184 -11.7 265 0.2
寶靈曼1 50 2.0 34.8 -5.17 8.96 0.45 58.3 -11.2- 242 2.7
寶靈曼2 48.6 2.88 33.7 -5.04 24 -6.77 140 -12.3 384 2.7
RANDOX1 59.7 6.36 40.8 3.88 7.67 4.3 62 -17.7 214 -16.1
RANDOX2 39 8.33 26.9 5.98 21.6 -5.67 144 -12.7 394 -17.1
Human1 72 4.18 46.7 -4.18 3.78 5.16 33.5 -7.5 168 -2.2
Human2 29.8 -2.68 29.8 -2.76 25.1 -5.08 151 -11.7 287 -9.1
Bio-Red1 63 0 39 1.28 7.1 0 24 -14.6 25 22
Bio-Red2 42 1.79 27 0 18.0 -4.44 201 -14.3 298 0.84

* 從總蛋白結(jié)果來看RANBOX與Bio-Red 相差為6.45%，而寶靈曼與Bio-Red 較為接近；
* 從白蛋白結(jié)果分析，寶靈曼與Bio-Red相對(duì)相差5.75%，與總蛋白結(jié)果明顯不同。Bio-Red則與汽巴康寧比較接近。
* UREA結(jié)果中凡是高值均上不去，分析其原因很可能與我們采用試劑盒的質(zhì)量有關(guān)，所以試劑盒的線性范圍理應(yīng)成為選擇試劑盒的重要依據(jù)之一。但從低值結(jié)果分析，也有5%的偏差（Bio-Red與Human）
* AST與ALT測(cè)定值均低于靶值，這就涉及我們選用什么K值問題。
* ALP測(cè)定中RANDOX（-16.6%）與寶靈曼（2.7%）靶值之間竟相差19.3%，這可能涉及試劑盒選用緩沖液種類，PH值以及所用ε值等有關(guān)。

通過上述結(jié)果比較，說明不同廠家生產(chǎn)的定值質(zhì)控血清靶值之間有的相差較大，提示我們決不能用定值質(zhì)控血清代替校準(zhǔn)品作校準(zhǔn)用。
六、 校準(zhǔn)方法
例如日立(Hitachi)系列您必須購買寶靈曼(Boehringer)的試劑及其校準(zhǔn)的說明書設(shè)置參數(shù)，用c.f.a.s.校準(zhǔn)血清進(jìn)行校準(zhǔn)，即可獲得各項(xiàng)目的校準(zhǔn)K值，同時(shí)觀察一下各項(xiàng)目測(cè)定時(shí)反應(yīng)進(jìn)程圖，檢查各項(xiàng)目參數(shù)設(shè)置是否在佳位置，如不在佳位置應(yīng)予以重新設(shè)置并測(cè)定。此時(shí)得到的K值即為準(zhǔn)確的校準(zhǔn)K值，然后測(cè)定待測(cè)的10至20份新鮮血清三次取其平均值，應(yīng)該說此結(jié)果是用Hitachi-Boehringer檢測(cè)系統(tǒng)所獲的測(cè)定值。然后用此血清值校準(zhǔn)其它測(cè)定系統(tǒng)。
表 日立7170、BM試劑連續(xù)四個(gè)月每天進(jìn)行校正(n=81)K值的變化

TP ALB ALT AST Crea Urea UA TG Chol Glu Ca CK GGT
Mean 3017 694 3023 2274 14756 2673 1543 1272 1449 1744 592 3864 2603
SD 86 6.69 63 49.7 1448 50.2 16.1 16.9 17.4 18.4 56.8 61.11 67.9
CV% 2.8 1.0 2.1 1.7 9.8 1.9 1.1 1.4 1.2 1.0 9.6 1.6 6.9

七、 關(guān)于酶活性測(cè)定校準(zhǔn)問題\r
有的主張不進(jìn)行校準(zhǔn)而采用固定K值，有的作者以為應(yīng)該進(jìn)行校準(zhǔn)。酶活力計(jì)算公式如下：
酶活力（u/l）=△A/min×V×106/(ε×v×1)
令k=V×106/（ε×v）
則酶活力（u/l）=△A/min×k
常用K值有以下幾種：
a) 理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（ε）來計(jì)算，如NADH為6.22×103
b) 實(shí)測(cè)K值：由于儀器波長(zhǎng)的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)實(shí)測(cè)ε值來設(shè)定K值
c) 廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值（有的廠家提供6.3×103）
d) 校準(zhǔn)K值：通過校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值
在日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上，可以得到幾種不同的酶K值，見下表\r
表 日立7170A全自動(dòng)生化分析儀上用不同方法得到幾種酶的K值
指示物 波長(zhǎng) 理論K值 實(shí)測(cè)K值 校準(zhǔn)K值
ALT NADH 340nm 2444 2642（8.1%） 3026（23.8%）
AST NADH 340mm 2444 2642（8.1%） 2775（13.5%）
CK NADPH 340mm 3878 3878（8.1%） 3886（8.3%）
GGT 4NA 405mm 1418 1539（8.5%） 1612（13.7%）
GGT 4NB 405mm 1475 1739（17.9%） ——
ALP 4NA（PH10） 405mm 757 825（8.9%） ——

注：1校準(zhǔn)物為寶靈曼c(diǎn).f.a.s，試劑也用寶靈曼的配套試劑。
2括號(hào)內(nèi)數(shù)字是該K值與理論K值相比的變化率
以上摘自張克堅(jiān)文章中

* 從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實(shí)測(cè)K值大于理論K值，這說明生化分析儀的測(cè)光系統(tǒng)還存在著一定誤差，如波長(zhǎng)、半寬度及光徑等偏差，使儀器達(dá)不到理論上的佳狀態(tài)；
* 校準(zhǔn)K值與實(shí)測(cè)K值之間也存在一定的差距，即使指示物和儀器相同，其差異可能由試劑及校準(zhǔn)品造成的；
* 作者認(rèn)為好使用校準(zhǔn)K值，但必須由兩個(gè)先決條件：1必須使用配套的試劑；2必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，但校準(zhǔn)K值應(yīng)有其溯源性。
關(guān)于酶活標(biāo)準(zhǔn)品，歐洲標(biāo)準(zhǔn)局（BCR）和美國國家標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)研究院（NIST）均發(fā)表了人血清基質(zhì)的酶活性標(biāo)準(zhǔn)物，相信不久將會(huì)有的標(biāo)準(zhǔn)（校準(zhǔn)）品問世。

八、 必須擬訂校準(zhǔn)計(jì)劃（文件）
校準(zhǔn)工作不是僅進(jìn)行一次就可萬事無憂一勞永逸，而必須經(jīng)?；?。按照“臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制（QC）的要求（草案）”必須要求擬定校準(zhǔn)計(jì)劃，其內(nèi)容包括：
1．建立校準(zhǔn)方法
⑴選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品，包括校準(zhǔn)品數(shù)目、類型和濃度；
⑵如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)；
⑶確定校準(zhǔn)的頻度。至少每六個(gè)月進(jìn)行一次校準(zhǔn)；
⑷如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)
* 改變?cè)噭┑姆N類，或者批號(hào)更換了。如果實(shí)驗(yàn)室能說明改變?cè)噭┡?hào)并不影響結(jié)果的范圍，則可以不進(jìn)行校準(zhǔn)；
* 儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件，這些都有可能影響檢驗(yàn)性能；
* 質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限，采取一般性糾正措施后，不能識(shí)別和糾正問題時(shí)；
2．每個(gè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)每臺(tái)儀器必需要有校準(zhǔn)計(jì)劃。每次校準(zhǔn)必須有詳情的記錄和分析。每次校準(zhǔn)記錄必須保存?zhèn)洳椤?/p>