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圍產(chǎn)期B族鏈球菌檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

文章來(lái)源:健康界發(fā)布日期:2022-11-03瀏覽次數(shù):50

B族鏈球菌(group B Streptococcus,GBS)又稱為無(wú)乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae),是一種兼性厭氧的革蘭氏陽(yáng)性球菌,主要定植于人體的消化道及泌尿生殖道,是導(dǎo)致圍產(chǎn)期母胎感染的主要條件致病菌之一。臨床中應(yīng)重視GBS的危害,選擇適宜的檢測(cè)方法,對(duì)圍產(chǎn)期孕婦進(jìn)行GBS感染的普遍性檢測(cè),對(duì)可能出現(xiàn)的母嬰感染進(jìn)行及時(shí)的預(yù)防性治療,以降低圍產(chǎn)期孕婦感染和不良妊娠結(jié)局的發(fā)生。

圍產(chǎn)期孕婦B族鏈球菌的檢測(cè)意義

GBS是導(dǎo)致圍產(chǎn)期孕婦感染的主要條件致病菌之一,孕婦體內(nèi)定植感染的GBS在一定條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)橹虏【?,?dǎo)致孕產(chǎn)婦或新生兒患侵襲性GBS病。GBS可通過(guò)產(chǎn)道上行擴(kuò)散感染至子宮和胎膜,可能導(dǎo)致孕婦發(fā)生晚期流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎膜早破,也可能導(dǎo)致孕婦出現(xiàn)無(wú)癥狀細(xì)菌尿、膀胱炎、腎盂腎炎、菌血癥、羊膜腔感染、產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎及產(chǎn)后膿毒血癥等情況,甚至出現(xiàn)胎死宮內(nèi)[4]。在圍產(chǎn)期和分娩期可將GBS感染新生兒,可能導(dǎo)致新生兒出現(xiàn)敗血癥和中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染,嚴(yán)重者可能出現(xiàn)死亡,而存活者可因炎癥損傷導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥。

國(guó)內(nèi)外GBS預(yù)防指南簡(jiǎn)介

美國(guó)疾病預(yù)防控制中心分別于1996年、2002年和2010年發(fā)布并修訂GBS防治指南,新指南建議,對(duì)于所有妊娠35~37周的圍產(chǎn)期孕婦分別采集陰道下1/3和直腸拭子進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),培養(yǎng)結(jié)果為陽(yáng)性的孕婦即存在GBS定植,應(yīng)給予GBS預(yù)防性治療(IAP)   [8]   。

中華醫(yī)學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)分會(huì)于2011年頒布的孕前和孕期保健指南將GBS列為妊娠33~36周產(chǎn)前檢查備查項(xiàng)目[9]。2021年中華醫(yī)學(xué)會(huì)圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)分會(huì)及中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科分會(huì)產(chǎn)科學(xué)組共同制定的《預(yù)防圍產(chǎn)期B族鏈球菌病的專家共識(shí)》中,所有妊娠35~37周的圍產(chǎn)期孕婦進(jìn)行GBS篩查,孕期患GBS菌尿者或既往有新生兒GBS病史者可直接按GBS陽(yáng)性處理。GBS篩查有效期為5周,若GBS陰性者超過(guò)5周未分娩,建議重復(fù)篩查[10]。

GBS實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法

1. 微生物學(xué)檢測(cè)方法

微生物學(xué)檢測(cè)方法主要包括普通培養(yǎng)法和顯色培養(yǎng)法,是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)GBS的經(jīng)典常規(guī)方法。普通培養(yǎng)法是明確GBS感染的金標(biāo)準(zhǔn),但其耗時(shí)較長(zhǎng)、操作過(guò)程復(fù)雜,并且孕婦生殖道中存在多種細(xì)菌,會(huì)影響GBS檢測(cè)結(jié)果的判斷;也可將標(biāo)本接種于添加不同抗生素的選擇性增菌肉湯后進(jìn)行分離鑒定[12],該種方法可有效抑制非目標(biāo)菌生長(zhǎng),但增菌后培養(yǎng)明顯增加了檢測(cè)時(shí)間,并對(duì)培養(yǎng)基的要求較高,因此臨床使用受到限制。顯色培養(yǎng)法是指在普通培養(yǎng)基中添加不同色素及混合抗生素,使得GBS生長(zhǎng)產(chǎn)生特異性特征。但有研究表明,該種方法的敏感度低于普通培養(yǎng)基,這可能與混合抗生素抑制雜菌的同時(shí)也抑制了GBS生長(zhǎng)有關(guān)[13]。

2. 免疫學(xué)檢測(cè)方法

免疫學(xué)檢測(cè)方法是采用特異性抗體檢測(cè)抗原,常用的檢測(cè)GBS的免疫學(xué)方法包括乳膠凝集試驗(yàn)(LA)、協(xié)同凝集試驗(yàn)(COA)、對(duì)流免疫電泳試驗(yàn)(CIE)、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)等。該種方法快速、便捷,但對(duì)于GBS菌量要求較高,因此可與增菌肉湯聯(lián)合使用[14]。但缺點(diǎn)在于免疫學(xué)檢測(cè)方法假陽(yáng)性、假陰性率較高。

分子生物學(xué)檢測(cè)方法

分子生物學(xué)方法檢測(cè)方法主要包括熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)、實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)、多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等。具有快速、準(zhǔn)確、敏感度高等特點(diǎn),是目前已知檢測(cè)方法中的佳方法,但其不足之處在于對(duì)檢測(cè)人員及設(shè)備的要求較高,費(fèi)用相對(duì)昂貴,且無(wú)法獲得藥敏結(jié)果。

熒光原位雜交技術(shù)檢測(cè)可快速檢測(cè)孕產(chǎn)婦陰道分泌物中的GBS[15-16]。

實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),是以GBS特異性蛋白C5a肽酶、CAMP因子、Sip表面免疫蛋白等基因?yàn)槟繕?biāo)基因,使用熒光定量PCR技術(shù)擴(kuò)增,用螢光的強(qiáng)度檢測(cè)產(chǎn)物的數(shù)量,進(jìn)而進(jìn)行GBS檢測(cè)[17-18]。

多重?zé)晒舛縋CR技術(shù),是通過(guò)以檢測(cè)GBS的莢膜多糖CPS基因?yàn)榘谢蚨⒌臋z測(cè)方法,可檢測(cè)已知的多種GBS莢膜多糖[19],因此該種方法在避免血清學(xué)檢測(cè)中的交叉反應(yīng)同時(shí),還可鑒定GBS的血清型。

環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是根據(jù)B族鏈球菌scpA基因的6個(gè)特殊區(qū)域設(shè)計(jì)了4條特異性引物,利用具有鏈置換活性的DNA聚合酶,在等溫條件下進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng),從而使靶基因高效擴(kuò)增[20]。該種技術(shù)具有高效且特異性高的特點(diǎn)。

總結(jié)與展望

國(guó)內(nèi)GBS實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法尚不統(tǒng)一,熱點(diǎn)已逐漸從傳統(tǒng)的培養(yǎng)法向免疫學(xué)、分子生物學(xué)等快速檢測(cè)的方法轉(zhuǎn)移。分子生物學(xué)的檢測(cè)方法靈敏性與特異性不斷提高,但對(duì)于檢測(cè)人員及設(shè)備的要求也隨之增加,在臨床上大規(guī)模推廣使用具有一定難度。并且,臨床中針對(duì)GBS檢測(cè)陽(yáng)性的圍產(chǎn)期婦女抗生素的選擇,仍依賴于使用傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。在實(shí)際臨床應(yīng)用中,面對(duì)各種不同情況,我們可根據(jù)各種檢測(cè)方法的不同特點(diǎn),選擇性使用不同的圍產(chǎn)期GBS檢測(cè)方法。例如,單獨(dú)使用分子生物學(xué)擴(kuò)增技術(shù)檢測(cè)GBS耗時(shí)短,可用于未行GBS篩查的孕婦產(chǎn)程中的即時(shí)檢測(cè),為GBS感染診斷與后續(xù)治療提供一定依據(jù) [2] 。目前國(guó)內(nèi)相關(guān)研究較為滯后。國(guó)內(nèi)圍產(chǎn)期GBS檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室方法方法均有所不足,仍需要進(jìn)一步研究快速、準(zhǔn)確、敏感且適用于大規(guī)模篩查的GBS圍產(chǎn)期檢測(cè)方法,為國(guó)內(nèi)圍產(chǎn)期GBS篩查及防治策略的制定提供基礎(chǔ)。