自體干細(xì)胞移植治療卵巢早衰患者安全性、可行性和有效性評(píng)估

卵巢早衰 (POF) 是一種異質(zhì)性臨床綜合征，定義為40歲之前卵巢活動(dòng)喪失。POF影響1-2%的育齡婦女，并受種族影響。

根據(jù)歐洲人類生殖和胚胎學(xué)會(huì) (ESHRE) 指南，該病的診斷標(biāo)準(zhǔn)是指: 40歲以前出現(xiàn)至少4個(gè)月以上閉經(jīng), 并有2次或促卵泡激素FSH＞40IU/L (兩次檢查間隔1個(gè)月以上) , 雌二醇<73.2pmol/L。這種疾病的發(fā)病率在育齡女性中超過1％。

POF的潛在病因多種多樣，包括遺傳和自身免疫性疾病、環(huán)境因素以及醫(yī)源性和特發(fā)性情況。

目前POF的治療管理包括社會(huì)心理支持、激素替代療法和生育管理。POF的不孕癥治療側(cè)重于卵母細(xì)胞捐贈(zèng)。捐贈(zèng)卵母細(xì)胞輔助受孕目前仍然是治療不孕癥的方法，并且不被許多宗教所接受。

懷特等人在卵巢皮質(zhì)組織中檢測到卵巢干細(xì)胞 (OSC)，這使得育齡婦女的卵巢組織能夠產(chǎn)生卵母細(xì)胞。研究表明，在老年小鼠中，卵巢組織再生微環(huán)境可以恢復(fù)生殖細(xì)胞制造卵母細(xì)胞的能力。POF卵巢中存在雙能OSC，可產(chǎn)生新的原始卵泡和上皮細(xì)胞巢（原始顆粒細(xì)胞）；因此，一種替代方法，例如自體干細(xì)胞療法，是一種很有前途的治療方法。

在這項(xiàng)研究中，我們進(jìn)行了自體ADSCs的卵巢內(nèi)移植，并評(píng)估了它們?cè)?/span>POF患者中的安全性、可行性、有效性和這些ADSCs的劑量調(diào)整。

方法：這項(xiàng)研究是一項(xiàng)非隨機(jī)I期臨床試驗(yàn)。9名確診為POF的女性被分為三組（每組n=3），接受5×106、10×106或15×106將自體ADSC懸液移植到一側(cè)卵巢中。移植后24h、移植后1、2周、1、2、3、6、12個(gè)月對(duì)參與者進(jìn)行隨訪。

主要目的是評(píng)估ADSCs移植的安全性。

次要目標(biāo)包括ADSCs移植對(duì)月經(jīng)恢復(fù)、激素水平（促卵泡激素 (FSH) 和抗苗勒管激素）、卵巢功能（通過超聲檢查評(píng)估竇卵泡計(jì)數(shù)和卵巢體積）以及劑量增加的影響。

結(jié)果

所有參與者均在2015年至2018年期間被招募參與。在50名參加的女性中，9名完成了研究。

15×106組2例POF患者在干預(yù)2個(gè)月后月經(jīng)恢復(fù)，1例至第5個(gè)月，1例在細(xì)胞移植后第2、4個(gè)月月經(jīng)恢復(fù)。另外兩名POF患者；1個(gè)5×106和1個(gè)10×106細(xì)胞組在干預(yù)后4周報(bào)告月經(jīng)恢復(fù)，干預(yù)后8個(gè)月和7個(gè)月分別建立（p>0.05）。

彩色方框表示返回月經(jīng)。月經(jīng)：陽性（+）和陰性（-）

AFC竇卵泡計(jì)數(shù)，N不適用，FSH促卵泡激素，D下降FSH<25IU/l，ND不下降<25IU/l，W周，M月

我們?cè)陔S訪的第1周和第2周觀察到4名患者的血清FSH水平下降低于25IU/l，第1個(gè)月和第2個(gè)月下降。在兩名患者中，FSH水平的下降保持穩(wěn)定，直到移植后1年。

在5×106ADSCs移植后，一名患者的FSH水平在第一個(gè)月（27IU/l）和第二個(gè)月（18.5IU/l）下降；然而，另一名患者在第二周（16IU/l）、第一個(gè)月（21IU/l）、第三個(gè)月（15.4IU/l）、第六個(gè)月（7.7IU/l）和第一年（5.9IU）顯示FSH下降/l) 在跟進(jìn)期間。

10×106后僅一名患者的FSH水平下降隨訪期間第一周（13.5U/l）、第二個(gè)月（24IU/l）和第三個(gè)月（10.6IU/l）的ADSCs移植。在另一名接受15×106ADSCs 的患者中，FSH水平從第二個(gè)月（7.9IU/l）、第三個(gè)月（23.1IU/l）、第六個(gè)月（26IU/l）和第一年（4.3國際單位/升）。

組間比較，5×106細(xì)胞組的FSH水平與10×106和15×106ADSCs組相比下降，并且在治療后1年觀察到低水平，細(xì)胞計(jì)數(shù)低于基線5×106組（平均值±SE：21.45±15.55vs. 68.3±24.5），p=0.631）。

ADSCs移植組血清FSH水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。在這些FSH水平降低的患者中，有3名患者出現(xiàn)月經(jīng)恢復(fù)。每個(gè)5×106、10×106和 15×106ADSCs組中的一名患者血清FSH持續(xù)下降，報(bào)告移植后第一個(gè)月和第二個(gè)月恢復(fù)正常月經(jīng)。

在隨訪期間，AMH血清水平幾乎保持不變，并且任何組中的任何患者都沒有在隨訪期間AMH水平增加或減少變化的穩(wěn)定模式。所有患者的AFC發(fā)生率均無差異。血清AMH和AFC比較顯示，ADSCs組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。

討論

卵巢原始卵泡耗竭、卵泡丟失增加或卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞之間的相互作用被破壞是POF的原因，但干細(xì)胞治療可以逆轉(zhuǎn)卵巢功能。在特發(fā)性POF病例中尤其如此，約占POF病例的90%。

目前的這項(xiàng)研究是一項(xiàng)非隨機(jī)I期臨床試驗(yàn)，旨在評(píng)估通過單側(cè)卵巢內(nèi)陰道或腹腔鏡給藥的三種劑量（5、10和15×106）自體ADSC的安全性、可行性、有效性和劑量調(diào)整9例符合POF診斷標(biāo)準(zhǔn)的特發(fā)性POF患者進(jìn)行移植。

參與者在隨訪期間沒有表現(xiàn)出任何早發(fā)性可能的副作用和繼發(fā)性并發(fā)癥。在移植數(shù)月的四名患者中觀察到月經(jīng)恢復(fù)。在15×106組中，兩名POF患者在干預(yù)后的第二個(gè)月恢復(fù)了月經(jīng)。5×106和10×106細(xì)胞組中的另外兩名POF患者在干預(yù)后1個(gè)月報(bào)告月經(jīng)恢復(fù)。我們觀察到四名患者的血清FSH水平下降低于25IU/l。在5×106和10×106的兩名患者中在ADSCs移植后1年的隨訪中，血清FSH顯示出不一致的下降。隨訪期間卵巢體積、AMH、AFC存在差異，細(xì)胞組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。

結(jié)論

本研究表明，ADSCs治療臨床應(yīng)用安全1年以上，可行且有效（降低FSH和恢復(fù)月經(jīng)）。每種細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果沒有差異，一些變量在移植5×106劑量的ADSC后顯示出良好的結(jié)果。我們建議為了達(dá)到佳效果，可以將5×106ADSCs移植兩次并雙邊移植到卵巢中，因?yàn)樗鼈優(yōu)閮蓚€(gè)卵巢提供了豐富的微環(huán)境并且具有成本效益。然而，需要對(duì)不同臨床試驗(yàn)階段的大量患者進(jìn)行進(jìn)一步的研究。