【預(yù)期用途】
口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、接觸性傳染病。在豬的預(yù)防免疫工作中,值得關(guān)注的就是強(qiáng)化免疫的接種時(shí)機(jī)問(wèn)題。在過(guò)高的抗體水平進(jìn)行免疫,過(guò)高的抗體水平還會(huì)中和疫苗,影響疫苗的免疫效果,導(dǎo)致免疫失??;在較低的抗體水平進(jìn)行免疫,又會(huì)出現(xiàn)抗體保護(hù)真空期,威脅豬的健康。
本試劑盒檢測(cè)反映抗體水平,利于指導(dǎo)免疫時(shí)機(jī)。用于檢測(cè)豬血清中口蹄疫O型病毒的抗體,不能用于區(qū)分口蹄疫野毒感染豬和用疫苗免疫豬。
【原 理】
本試劑盒系由預(yù)包被豬口蹄疫病毒O型(OZK/93株+OS/99株)VP1表位多肽抗原的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清或血漿中口蹄疫病毒特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí),在包被板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有口蹄疫病毒的特異性抗體,則將與包被板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。
【試劑盒組成】
1 . | 口蹄疫病毒抗原預(yù)包被微孔板條 | 96T×1 |
2. | 酶標(biāo)記物 (紅蓋) | 11ml×1 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 25ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 (透明蓋) | 20ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 |
8. | 陽(yáng)性對(duì)照 (紅蓋,已滅活) | 0.5ml×1 |
9. | 陰性對(duì)照 (綠蓋,已滅活) | 0.5ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) |
12. | 說(shuō)明書 | 1份 |
【樣品制備】 取動(dòng)物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品短期可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
【試驗(yàn)操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條,設(shè)空白、陰性及陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl;空白對(duì)照孔不加。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A)。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫(25℃左右),并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
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