登革病毒核酸檢測試劑注冊(cè)審評(píng)概述

登革熱是由登革病毒（ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ，ＤＶ）引起的一種急性傳染病，廣泛流行于全球熱帶及亞熱帶地區(qū)，多在城市和半城市地區(qū)，通常由蚊媒傳播。近幾十年全球登革熱發(fā)病率大幅度增長。根據(jù)ＷＨＯ的官方數(shù)據(jù)，在２０１７－２０１８年病例數(shù)量下降之后，２０１９年病例數(shù)量急劇增加，其中來自我國的病例數(shù)報(bào)道也顯著增加。

登革病毒感染可表現(xiàn)為無癥狀隱性感染、非重癥感染及重癥感染等。典型的登革熱病程分為三期，即急性發(fā)熱期、極期和恢復(fù)期。

登革病毒屬黃病毒科黃病毒屬，為ＲＮＡ病毒，基因組由單股正鏈ＲＮＡ組成，共有４個(gè)血清型（ＤＥＮＶ－１、ＤＥＮＶ－２ ＤＥＮＶ－３和ＤＥＮＶ－４），４種血清型均可引起登革熱的感染和流行，其中２型傳播廣泛， ＤＥＮＶ的四種血清型在基因組序列上有６５－７０％的同源性，感染其中一型，將產(chǎn)生針對(duì)本血清型的保護(hù)。然而，研究表明，當(dāng)再次感染異型ＤＥＮＶ時(shí)，會(huì)增加發(fā)生重癥登革熱的風(fēng)險(xiǎn)。ＤＥＮＶ與乙腦病毒和西尼羅病毒也有部分抗原相同。

登革病毒核酸檢測與登革熱的診斷

登革病毒感染的常用的實(shí)驗(yàn)室檢測包括血常規(guī)、血生化檢查、病原學(xué)和血清學(xué)檢查等。其中登革病毒核酸檢測是登革熱病原學(xué)檢測的重要參考。早在２００９年，ＷＨＯ就將病毒分離、ＮＳ１抗原檢測和核酸檢測三種方法列為的登革病毒感染的早期檢測手段。在２０１７年，更是將登革病毒核酸檢測，列為對(duì)疑似急性感染期患者血清樣本檢測的首要方法。我國《登革熱診療指南》中，明確：患者急性發(fā)熱期可應(yīng)用登革病毒核酸檢測進(jìn)行早期診斷。疑似或臨床診斷病例，急性期血清檢測出病毒核酸，可作為確診依據(jù)。我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《登革熱診斷》，也將登革病毒ＲＮＡ檢測列入登革熱病原學(xué)檢測方法，用于登革熱的早期診斷。

登革病毒核酸檢測試劑的上市批準(zhǔn)情況

目前全球僅少數(shù)幾家公司生產(chǎn)的登革病毒核酸檢測試劑批準(zhǔn)上市。在美國，美國疾控中心生產(chǎn)的ＣＤＣ ＤＥＮＶ－１－４ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＲＴ－ＰＣＲ Ａｓｓａｙ，已經(jīng)ＦＤＡ批準(zhǔn)上市。另外，馬來西亞、新加坡等少數(shù)登革熱流行區(qū)域國家，也有相關(guān)檢測試劑批準(zhǔn)上市。在我國，僅中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的“登革病毒核酸檢測試劑盒（ＰＣＲ－熒光探針法）”和“登革病毒分型核酸檢測試劑盒（ＰＣＲ－熒光探針法）”已批準(zhǔn)上市。

審評(píng)思路

１． 預(yù)期用途的聲稱

與其他病原體檢測試劑相似，此類產(chǎn)品應(yīng)明確檢測樣本類型（血清和／或血漿）、預(yù)期人群（如，曾前往登革熱流行區(qū)、有高熱等臨床表現(xiàn)的疑似人群）。同時(shí)，需要明確可檢出的登革病毒型別及是否可以進(jìn)行分型檢測。

２． 分析性能評(píng)估

由于登革病毒核酸檢測主要用于急性期感染患者（＜５天）的早期診斷，且登革病毒感染的及時(shí)診斷是應(yīng)對(duì)登革熱疫情的重要手段之一，因此需采用對(duì)已知濃度（ＰＦＵ／ｍＬ或ＴＣＩＤ５０／ｍＬ）登革病毒液進(jìn)行系列梯度稀釋的方法，對(duì)此類檢測試劑的分析靈敏度進(jìn)行準(zhǔn)確的建立，并采用１～４型登革病毒亞型病毒株進(jìn)行低檢出限的驗(yàn)證。

由于登革熱的流行病區(qū)分布，臨床表現(xiàn)等，與其他蟲媒疾病，如基孔肯雅熱、寨卡病毒病、黃熱病存在易混淆的情況。因此，臨床上需要進(jìn)行與上述疾病的鑒別區(qū)分。對(duì)于登革病毒檢測試劑，應(yīng)在特異性研究中，對(duì)黃熱病病毒、森林腦炎病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒、乙型肝炎病毒等進(jìn)行交叉反應(yīng)性研究，證明檢測試劑可特異檢出登革病毒的能力。對(duì)于登革病毒分型檢測試劑，還應(yīng)對(duì)不同型別之間的特異性檢出能力進(jìn)行額外的研究。

３． 臨床試驗(yàn)

考慮到目前已上市同類檢測試劑較少，臨床試驗(yàn)可以選擇與已上市產(chǎn)品或核酸序列測定方法進(jìn)行比較研究。測序方法的性能驗(yàn)證應(yīng)至少包含對(duì)其低檢出限的評(píng)價(jià)。

為保證臨床試驗(yàn)包含一定數(shù)量的陽性樣本，臨床試驗(yàn)應(yīng)以發(fā)熱疑似登革熱患者作為研究對(duì)象，入組樣本注意與預(yù)期人群相一致。

目前對(duì)登革熱／重癥登革熱沒有特異治療辦法，但及早發(fā)現(xiàn)和適宜的醫(yī)護(hù)可將死亡率降到１％以下?？梢哉f，登革熱患者良好的臨床結(jié)局，很大程度上依賴于對(duì)登革熱疾病準(zhǔn)確的早期診斷。作為登革病毒感染早期輔助診斷的主要手段之一，登革病毒核酸檢測應(yīng)具備良好的特異性和靈敏度。產(chǎn)品的研發(fā)與驗(yàn)證應(yīng)充分合理，并注意在說明書中注明產(chǎn)品的主要性能、預(yù)期人群及使用局限性，以更好的指導(dǎo)臨床使用。

（作者單位：國家藥監(jiān)局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心審評(píng)六部）