nm23和VEGF-C在胃癌組織中的表達及意義

作者：鞏有方,董海生,張鳳敏,姜衛(wèi)星　　作者單位：河北省邯鄲市，河北冀中能源峰峰集團總醫(yī)院外二科(鞏有方、張鳳敏、姜衛(wèi)星、張浩、趙健);峰峰羊渠河礦社區(qū)管理處醫(yī)院外科(董海生)

　　【摘要】目的探討nm23及血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)表達與胃癌的生物學(xué)行為及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法　應(yīng)用免疫組化法對52例胃癌組織中nm23及VEGF-C表達進行測定。結(jié)果　nm23低表達或VEGF-C高表達者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)，而與腫瘤大小、TNM、性別無關(guān)(P>0.05)。結(jié)論　通過nm23及VEGF-C表達檢測對估計腫瘤轉(zhuǎn)移預(yù)后有顯著意義，而且二者協(xié)同檢測意義更大。

　　【關(guān)鍵詞】 血管內(nèi)皮生長因子;胃癌;免疫組化;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

　　【Abstract】　ob[x]jective　To investigate the correlation between the ex[x]pression of nm23，vascular endothelium growth factor-C (VEGF-C) and biological behavior as well as lymphatic me[x]tastasis of gastric carcinoma tissues.Methods　The immunohistochemical method was used to detect the ex[x]pression of VEGF-C and nm23 in 52 cases of gastric carcinoma tissues.Results　The lymphatic me[x]tastasis rate in low-ex[x]pression of nm23 or high-ex[x]pression of VEGF-C of gastric carcinoma tissues was significantly higher than that without lymphatic me[x]tastasis tissues (P<0.05)，however，which was not related with the size of carcinoma，TNM and patients’ sex (P>0.05).Conclusion　The detection of nm23 and VEGF-C ex[x]pression levels plays an important role in evaluating patients’ prognosis and carcinoma me[x]tastasis，furthermore，the combined detection of nm23 with VEGF-C has more significant clinical value.

　　【Key words】　vascular endothelium growth factor-C;gastric carcinoma; immunohistochemistry;lymphatic me[x]tastasis

　　胃癌是常見的惡性消化道腫瘤。全部惡性腫瘤的第三位，胃癌的主要的轉(zhuǎn)移方式之一是經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移，是影響患者預(yù)后的一個重要因素。血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)主要作用介導(dǎo)腫瘤淋巴管、血管生成和增殖，從而促進腫瘤細胞生長和侵襲，nm23是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，而該基因缺失或者突變，均會促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。本試驗通過VEGF-C和nm23在胃癌組織中表達情況來探討其預(yù)后的價值。

　　1　資料與方法

　　1.1　一般資料

　　選取河北冀中能源峰峰集團總醫(yī)院2005年5月至2008年12月手術(shù)切除及胃癌標本52例，所有患者術(shù)前均未行化療和放療。年齡32～74歲，平均年齡48.2歲;其中Ⅰ期10例，Ⅱ期24例，Ⅲ期18例，此外取24例癌旁正常組織作為對照。

　　1.2　方法

　　兔抗人多克隆VEGF-C抗體，S-P試劑盒由北京中山生物技術(shù)有限公司提供，染色方法參照試劑盒說明，分別用1.5%正常兔血清和0.01 mol/L PBS液取代抗體作為替代對照和空白對照?？筺m23基因產(chǎn)物單克隆抗體由美國Santa Cruz公司生產(chǎn)，免疫組化染色采用抗生蛋白鏈菌素-生物素標記法(LSAB)。試劑盒有丹麥DAKO公司生產(chǎn)，按產(chǎn)品說明書試驗。TBS代替抗體作陰性對照。

　　1.3　結(jié)果判定

　　nm23陽性染色為位于細胞漿的棕黃色顆?；驁F塊，當(dāng)陽性染色的癌細胞<30%時定為陰性表達，即低表達;≥30%時為正常表達[1]。選染色均為癌細胞密集區(qū)，在400倍視野下，以著色細胞占視野細胞總數(shù)的多少分為0～3級。0級：0;1級：<25%;2級：26%～50%;3級：>50%。1級以上為陽性，0級為陰性。

　　1.4　統(tǒng)計學(xué)分析

　　計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

　　2　結(jié)果

　　2.1　nm23和VEGF-C在胃癌和癌旁正常胃組織中的表達的關(guān)系

　　nm23在癌細胞和癌旁正常胃組織中都可見陽性表達，但nm-23在52例胃癌組織中陽性表達23例(44.23%)，低于正常組織的83.33%(P<0.01);VEGF-C在胃癌組織中陽性表達33例(63.46%)，顯著高于正常胃組織的29.17%(P<0.01)。

　　2.2　nm23低表達與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系

　　52例胃癌組織中nm23低表達有29例，低表達率為55.77%，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中有26例，其中低表達有10例(38.46%);在分化程度差組中，胃癌20例中低表達有5例(25.00%)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.01)。在分化程度差組明顯低于分化程度高組，而nm23低表達在性別、腫瘤大小和TNM分期間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

　　2.3　VEGF-C高表達與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系

　　52例胃癌中，VEGF-C陽性表達33例(63.46%)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例中，VEGF-C表達有19例(73.08%)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。分化程度組中，分化程度差20例中，VEGF-C高表達18例(90%)，二者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而VEGF-C表達在腫瘤大小、患者性別、TNM分期關(guān)系間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。nm23低表達、VEGF-C高表達與臨床各因素關(guān)系

　　2.4　相關(guān)性分析

　　在29例nm23低表達陽性患者中，有24例VEGF-C為陽性表達。23例nm23低表達陰性患者中，VEGF-C為陰性表達8例。提示nm23低表達與VEGF-C高表達呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.61，P<0.01)。

　　3　討論

　　3.1　nm23

　　1988年nm23基因由美國國立癌癥研究所的Steeg等[2]應(yīng)用克隆雜交技術(shù)首先從小鼠的黑色素瘤細胞中分離得到。該基因定位于人類染色體17q22，產(chǎn)物為152個氨基酸組成的17 kd核內(nèi)及胞漿蛋白，該蛋白與二磷酸核苷激酶(nucleotide diphosphate kinase，NDPK)的氨基酸序列具有高度同源性。目前認為nm23可能是一種具有NDPK功能的基因，并由此可能抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移能力，NDPK一方面參與細胞骨架微管蛋白的多聚化以調(diào)節(jié)細胞運動，并參與細胞分裂時紡錘體的形成來調(diào)節(jié)細胞分化，另一方面通過影響G蛋白的信號傳遞發(fā)揮負調(diào)節(jié)作用[3-5]。nm23基因表達與多種腫瘤好轉(zhuǎn)呈負相關(guān)[4]。本研究發(fā)現(xiàn)：胃癌組織中nm-23的表達(55.77%)顯著低于正常組織的87.5%(P<0.05)。在組內(nèi)比較中，nm-23在分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這提示nm-23基因在抑制腫瘤細胞的活性，在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中起一定的作用。本實驗說明，nm-23基因具有抑制腫瘤細胞的活性，該基因缺失、突變或失活均會促進胃癌的發(fā)生及轉(zhuǎn)移，可以作為腫瘤預(yù)后的一項指標。

　　3.2　VEGF-C

　　VEGF-C通過旁分泌方式特異地作用于表達VEGF-C的血管內(nèi)皮細胞，使血管內(nèi)皮細胞分裂增殖，從而形成新生血管。在沒有血管形成時，大多數(shù)腫瘤生長的直徑很少超過1 mm。目前研究VEGF-C作用機制是選擇性作用于血管內(nèi)皮細胞膜上2種受體：flt-1、KDR，通過磷酸肌醇特異性磷酸酯酶c使胞內(nèi)IP3濃度升高而發(fā)揮作用。VGEF-C的表達與腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，可以作為腫瘤預(yù)后的預(yù)測因素之一。目前研究VEGF-C在術(shù)前預(yù)測甲狀腺癌[6]、結(jié)腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面的可能性;而胃癌方面結(jié)論仍有爭論;有研究發(fā)現(xiàn)人胃癌細胞中VEGF-C的表達與性別、年齡、大小無關(guān)，但與腫瘤細胞浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7]。狄茂軍等[8]經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C和VEGFR-3蛋白的表達隨臨床分期的升高其表達有增強的趨勢，但均未達到統(tǒng)計學(xué)意義的差別。Onogawa等[9]研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C表達與胃癌漿膜浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。Amioka等[10]通過研究胃癌標本發(fā)現(xiàn)VEGF-C與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，VEGF-C陽性組胃癌淋巴管密度明顯高于陰性組。因此，在胃癌的生長及轉(zhuǎn)移過程中，VEGF-C是一項不可或缺的因素之一。

　　本研究表明，在有可能影響胃癌生物學(xué)行為的因素當(dāng)中， VGEF-C高表達在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。亦可能與腫瘤細胞的生物學(xué)特性有關(guān)，這需要以后進一步研究。新研究患者應(yīng)用抗VEGF-C抗體能明顯抑制腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，這也從另一方面提示VEGF-C在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移中的作用。

　　【參考文獻】

　　1　張聲，葉樂華，杜華.P53過表達和nm23低表達與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的探討.中華腫瘤雜志，1995,17：418-420.

　　2　Steeg PS，Bevilacqua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene association with low me[x]tastatic potential.J Natl Cancer Inst,1998,80：200.

　　3　Demirbas S，Sucullu I，Yildirim S，et al.Influence of the c-erbB-2，nm23，bcl-2 and p53 protein markers on colorectal cancer.Turk J Gastroenterol,2006,17：13-19.

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　　5　Wang LB，Jiang ZN，F(xiàn)an MY，et al.Changes of histology and ex[x]pression of MMP-2 and nm-23-H1 in primary and me[x]tastatic gastric cancer.World J Gastroenterol,2008,14：1612-1616.

　　6　鞏有方，趙現(xiàn)斌，張浩，等.甲狀腺乳頭狀癌組織中CD105、VEGF-C表達與其轉(zhuǎn)移的關(guān)系.中國醫(yī)師雜志，2009,11：1253-1255.

　　7　錢立元，魏源水，張翼，等.VEGF-C在胃癌組織中的表達與淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究.中國普通外科雜志，2007,16：915-918.

　　8　狄茂軍，王衛(wèi)星，蘭明銀，等.VEGF-C與VEGFR-3在胃癌組織中的表達及意義.臨床消化病雜志，2008,20：150-152.

　　9　Onogawa S，Kitadai Y，Amioka T，et al.ex[x]pression of vascular endothelial growth factor-C and D(VEGF-C and VEGF-D)in early gastric carcinoma：correlation with clinicopathological parameters.Cancer Lett,2005,226：85.

　　10　Amioka T，Kitadai Y，Tanaka S，et al.Vascular endothelial growth factor-C ex[x]pression predicts lymph node me[x]tastasis of human gastric carcinomas invading the submucosa.Eur J Cancer,2002,38：1413-1419.